Procedimiento para la realización y evaluación de ensayos de mezclado y medición para la medición de cinéticas de reacción así como de concentraciones y afinidades de analitos en formato múltiplex

摘要

Procedimiento para el análisis múltiplex de varios analitos que comprende las etapas de: a) Utilizar un portador, sobre el que están inmovilizadas al menos dos poblaciones de micropartículas diferentes, diferenciándose las diferentes poblaciones de micropartículas en su codificación de fluorescencia y conteniendo al menos dos de las poblaciones de micropartículas con codificación de fluorescencia diferentes en cada caso micropartículas, que están ocupadas con una determinada población de moléculas aceptoras específica, diferenciándose entre sí las poblaciones de moléculas aceptoras de las al menos dos poblaciones de micropartículas con codificación de fluorescencia diferentes. b) Medir la fluorescencia del portador de la etapa a) con una resolución óptica 1 antes de poner en contacto el portador con la muestra que va a analizarse o antes del inicio de la reacción, permitiendo la resolución 1: - una diferenciación de singletes, dupletes, tripletes, multipletes y monocapas de micropartículas, y - la determinación de la situación local de las micropartículas inmovilizadas individuales de las respectivas al menos dos poblaciones de micropartículas diferentes sobre el portador teniendo en cuenta la codificación de fluorescencia en cada caso diferente de las al menos dos poblaciones de micropartículas diferentes. c) Poner en contacto el portador de la etapa a) con la muestra que va a analizarse, provocando la interacción del respectivo analito con la molécula aceptora específica para el mismo sobre la micropartícula inmovilizada correspondiente una variación de la fluorescencia. d) Realizar al menos una medición adicional de la fluorescencia del portador durante o después de la puesta en contacto o del inicio de la reacción según la etapa c) con una resolución 2. e) Asociar los valores de fluorescencia medidos con la resolución 2 con los singletes, dupletes, tripletes, multipletes y monocapas de micropartículas individuales identificados localmente sobre el portador según la etapa b) y asociados a una determinada población de moléculas aceptoras. f) Determinar la variación de la fluorescencia mediante la puesta en contacto según la etapa c) para cada singlete de micropartículas identificado localmente y cada micropartícula en un duplete, triplete, multiplete y monocapa sobre el portador.