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一种非诊断目的多切刻酶位点介导的核酸恒温扩增检测方法，其特征在于具体检测过程包括以下步骤：(1)、目标核酸与模板核酸的杂交互补：先对目标核酸通过碱基互补配对作用与模板核酸分子进行特异性杂交，模板核酸结构为修饰荧光基团与猝灭基团的分子信标，分子信标的一端标记荧光基团，荧光基团为FAM，HEX，TET，JOE，TAMRA，Cy5或者Cy3；分子信标的另一端标记猝灭基团，猝灭基团选自DABCYL，ECLIPSE，TAMRA或BHQ；分子信标有两个切刻酶位点；(2)、聚合酶与切刻酶协同循环扩增：聚合酶结合到目标核酸的3’端，以模板核酸为模板延伸目标核酸形成双链，切刻酶作用于该双链的切刻位点处，进行切刻，形成切口，聚合酶结合到该切口处，进行延伸链置换，聚合酶与切刻酶协同循环扩增，不断产生能够与分子信标结合的产物一和能够与模板核酸稳定结合的产物二；(3)、产物一与模板核酸结合进行循环扩增：将形成的产物一与模板核酸进行杂交，聚合酶以产物一3’端为起点，以模板核酸为模板进行聚合延伸，切刻酶作用于延伸形成的切刻位点处，进行切刻，形成切口，聚合酶再结合到切刻酶切刻形成的切口处，进行延伸链置换，聚合酶与切刻酶协同循环扩增，不断产生产物二；(4)、信号检测：将步骤(2)和步骤(3)分别产生的产物二与模板核酸进行杂交，产生信号，在35‑40℃恒温条件下通过荧光检测装置对产生的信号进行检测，实现核酸恒温扩增检测。 |
