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一种由两种异源的抗体通过交联反应而获得的异源交联物，其特征在于，所述的异源交联物包括由小鼠anti‑RV McAb和健康的未感染RV的人IgG所形成的四聚体形式的异源交联抗体。所述的异源交联物是由以下方法制备得到：(1)将5mg小鼠anti‑RV McAb溶解于交联缓冲液中，搅拌加入50μl SPDP交联剂，室温下反应2个小时后，装入透析袋，用还原缓冲液透析，换液四次；其中所述的交联缓冲液包括0.1M磷酸钾,0.1M NaCl,pH7.5；所述交联剂浓度为3.2mg/ml，交联剂溶解于无水乙醇中；所述的还原缓冲液包括0.1M乙酸钠,0.1M NaCl,pH4.5；(2)将5mg健康的未感染RV的人IgG溶解于交联缓冲液中，搅拌加入50μl SPDP交联剂，室温下反应2个小时后，装入透析袋，用交联缓冲液透析，换液四次；(3)在(1)中加入30μl DTT，室温反应30分钟后，装入透析袋，用交联缓冲液透析，换液四次；所述的DTT浓度为1M，是将DTT溶解于0.01M乙酸钠溶液至终浓度为1M，pH5.2；(4)将(2)、(3)中的处理物混合，在4℃下反应15个小时；(5)往(4)中加入0.4mg碘乙酰胺封闭剂，反应30分钟以封闭未反应的活性基团，然后装入透析袋，用交联缓冲液透析，换液四次；(6)将(5)中的产物装载到HiLoad 16/60Superdex 200PG凝胶过滤柱中，以交联缓冲液进行洗脱，并利用HD‑3紫光分析仪实时检测洗脱产物在280nm波长时的吸光值，同时用XWT‑S小型记录仪绘制层析图谱，按峰收集洗脱产物；(7)获得含有四聚体形式的异源交联抗体的异源交联物。 |
