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一种离体组织培养紫萁的方法，其特征在于：培养紫萁的方法步骤如下：1）外植体的选择：取紫萁孢子体生殖叶植株顶端未成熟的绿色孢子囊穗；2）消毒：将外植体放在漏网中，用自来水冲洗30分钟，然后将洗净的外植体放入培养瓶中，在超净工作台上用75%的酒精表面消毒60秒，然后用无菌水冲洗3次，再用0.1%升汞消毒8分钟，无菌水冲洗3次；3）接种：在超净工作台上取出已消毒的紫萁孢子切成小段，每段约0.5cm长，接种于孢子萌发琼脂培养基中培养；培养条件：温度23‑26℃，光照时间12h/d，光照强度2300‑2500 lx；4）原叶体的增殖培养：将萌发的幼原叶体转接于原叶体增殖琼脂培养基中培养：培养条件，温度23‑26℃，光照时间12h/d，光照强度2300‑2500 lx；5）诱导原叶体受精萌发孢子体：将已增殖的原叶体取出放入装有液体培养基的无菌三角瓶中，在摇床上振荡4‑10min促进原叶体的授精，分别取适量的原叶体接入放置有滤纸桥或者棉花的培养瓶中，并倒入20ml的MS液体培养基，放入培养室培养；培养条件：温度23‑26℃，光照时间12h/d，光照强度2300‑2500 lx；6）孢子体增殖培养将萌发的孢子体转接于放置有滤纸桥或者棉花的培养瓶中，并倒入20ml的孢子体增殖液体培养基中培养；培养条件：温度23‑26℃，光照时间12h/d，光照强度2300‑2500 lx。 |
