一种四氢嘧啶高产大肠杆菌工程菌及其应用

摘要

本发明提供了一种高产四氢嘧啶的重组大肠杆菌和利用该重组菌制备四氢嘧啶的方法。本发明提供的重组大肠杆菌是将含有延长盐单胞菌Halomonas elongate四氢嘧啶合成基因簇EctABC的重组质粒导入大肠杆菌后得到的。本发明的重组大肠杆菌实现了四氢嘧啶合成的三个关键酶在阿拉伯糖启动子的调控下可溶性表达。诱导表达后的菌体以天冬氨酸钠为前体通过生物转化的方法实现了四氢嘧啶的高效分泌型合成。每克菌体可以合成1.1克四氢嘧啶，其中超过90％的四氢嘧啶分泌至胞外。本发明提供的利用该重组菌制备四氢嘧啶的方法，便于产物的下游纯化分离，对四氢嘧啶的工业化生产和大规模应用具有重大意义。

主权项

含有具有下述任一核苷酸序列的核酸片段的重组大肠杆菌或重组载体：1）序列表中SEQ ID№：1所示的核苷酸序列；2）编码序列表中SEQ ID№：2、SEQ ID№：3和/或SEQ ID№：4所示蛋白质序列的多核苷酸序列；3）在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID№：1限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；4）与1）或2）或3）限定的核苷酸序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列；具体的，所述同源性为95%以上；再具体的为96%以上；再具体的为97%以上；再具体的为98%以上；再具体的为99%以上。