一种N-甲基靛红酸酐快速标记多糖的制备方法

摘要

一种N-甲基靛红酸酐快速标记多糖的制备方法，属于荧光标记技术领域。本发明以荧光标记物N-甲基靛红酸酐标记多糖，其方法为：N-甲基靛红酸酐储备液与多糖溶液在35℃条件下孵化15~20min，并通过有机溶剂沉淀法对荧光标记多糖进行分离纯化，该反应反应条件温和、反应时间短、荧光标记多糖分离纯化方法简单。荧光标记后的多糖，可以使用常规的荧光检测器进行检测，便于对多糖的功能和机制进行研究。

主权项

一种N‑甲基靛红酸酐快速标记多糖的制备方法，其特征是：（1）样品处理：用0.1mol/L、PH 8.0的硼酸盐缓冲液和5~10mL 浓度w/v为50%的二甲基亚砜溶液溶解配制成40~80mg/mL多糖溶液；（2）荧光标记储备液的制备：N‑甲基靛红酸酐用二甲基亚砜溶解配制成20mg/mL溶液；（3）将步骤（2）得到的荧光标记储备液加入到步骤（1）得到的多糖溶液中进行孵化；（4）荧光标记多糖的分离：采用有机溶剂沉淀法，即将步骤（3）的荧光标记多糖溶液加入无水乙醇，利用多糖醇沉的性质将多糖分离，第一次离心得到的上清液与无水乙醇体积比为1:2~1:4，再次醇沉离心；（5）荧光标记多糖的纯化：将两次得到的沉淀混合，用蒸馏水复溶，使用砂芯过滤装置过滤以除去未与多糖反应的水不溶性N‑甲基靛红酸酐和杂质，滤液冻干，即可得到荧光标记多糖。