鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体二联灭活疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体二联灭活疫苗的制备方法。本发明所涉及的疫苗是采用免疫原性良好的鸡毒支原体强毒CR株及鸡滑液囊支原体HN01株接种于适宜培养基培养，收获培养物，经甲醛溶液灭活后，与油佐剂混合乳化制成。用于预防鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体病。本发明的鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体二联灭活疫苗免疫接种，可同时预防两种病原，减轻免疫接种的工作量，制备出的疫苗性能稳定，免疫效果好，更适合我国生产实际。

主权项

一种鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体二联灭活疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）菌种：鸡毒支原体强毒CR株、鸡滑液囊支原体HN01株，冻干保存；（2）生产菌种的制备：取冻干菌种，分别用液体培养基溶解后，接种于液体培养基获得一级种子，取一级种子接种于液体培养基上获得二级种子；（3）制苗用菌液的制备：分别采用机械搅拌发酵罐连续增菌培养鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体，先将发酵罐中鸡毒支原体或鸡滑液囊支原体基础培养基成分进行灭菌，待温度降至37～38℃时，按1∶5～1∶10的分别比例接种鸡毒支原体或鸡滑液囊支原体二级种子液，调节pH、补料，采用连续增菌培养方式，pH为7.6～7.8，37℃恒温培养，罐压为0.03～0.05Pa，溶氧量为40%，待pH下降至6.5，添加基础培养基为原培养体积的30%，用20%NaOH调pH7.6～7.8，如此进行两次增菌培养，待第二次增菌培养pH下降到6.4时，加甲醛溶液灭活，连续增菌培养结束，留样检验，置2～8℃保存，不超过2日；（4）配苗：鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体灭活抗原按体积比1:1等比例混合后，取96份灭活菌液，加入4份吐温‑80，混匀后作为水相溶液备用；取96份注射用白油，加入4份司本‑80，混匀后作为油相溶液备用；将油相溶液和水相溶液按照体积比2.8～3.5:1混和均匀，即获得所述鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体二联灭活疫苗。