通过Cas9-crRNA复合物的RNA指导的DNA裂解

摘要

嗜热链球菌CRISPR3/Cas系统的Cas9-crRNA复合物的分离或体外组装及其用于DNA裂解的用途，所述DNA具有与crRNA互补的核苷酸序列和原型间隔子毗邻基序。使用RNA导向的DNA核酸内切酶在体外或体内对靶标DNA分子进行位点特异性修饰的方法，所述DNA核酸内切酶包含RNA序列及RuvC活性位点基序和HNH活性位点基序中至少一种；通过至少一个点突变使多肽中活性位点(RuvC或HNH)之一失活将Cas9多肽转化为双链DNA的切口酶裂解一条链的方法；在体内或体外组装活性多肽-多核糖核苷酸复合物的方法；以及在体外对Cas9-crRNA复合物的特异性进行重新编程的方法，该方法中使用了含有单一的重复序列-间隔子-重复序列单元的序列盒子。

主权项

用于对靶标DNA分子进行位点特异性修饰的方法，所述方法包括在合适的条件下将靶标DNA分子和RNA导向的DNA核酸内切酶相接触，所述RNA导向的DNA核酸内切酶含有至少一个RNA序列以及RuvC活性位点基序和HNH活性位点基序中的至少一个；以使得靶标DNA分子在某个区域受到修饰，所述区域是由RNA序列与靶标DNA分子的互补结合所确定的。