一种提高宿主细胞产酶活性的方法

摘要

本发明涉及农业、食品、医药卫生及环境工程行业中利用宿主细胞生产各类酶制品制剂的技术领域，具体涉及一种提高宿主细胞产酶活性的方法，它采用如下的技术方案：先采用摇瓶培养，在1m³发酵罐培养发酵培养基，培养结束后采用对发酵菌及酶液施加直流电压0.1-5V/cm，直流电流1-120分钟；它在发酵工程细胞的产酶的过程中，对发酵产生的细胞及酶液混合物应用直流电场刺激，可明显提高细胞产酶活力20%～30%，且操作工艺简单，可控性强，适宜于大批量发酵生产，可有效降低应用细胞工程生产饲料、食品、医药卫生等工业用酶的生产成本，节约能源和资源，社会经济效益显著，符合国家关于发酵工业节能降耗的绿色发展趋势。

主权项

一种提高宿主细胞产酶活性的方法，其特征在于：它采用如下的技术方案：步骤一：摇瓶培养，采用如下的方法步骤：（1）250 mL的锥形瓶中装摇瓶培养基50 mL，从斜面上接种一环种子，放置于旋转式摇床上在26℃下培养120 h，摇床转速220 r／min，得发酵培养基；将发酵培养基(按18 L装液量)配好并装入发酵罐内，121℃下灭菌30 min，冷却至26℃后接种1个茄型瓶种子(用无菌水将菌种刮下)，搅拌转速500 r／min，通风量1 VVM；（3）1 m³ 发酵罐培养：将放大发酵培养基(按60％装液量)配好并装入罐内，121℃下灭菌30 min，冷却至26℃后接种3个茄型瓶种子(用无菌水将菌种刮下)，搅拌转速200 r／min，通风量1 VVM；步骤二：直流电刺激，采用如下方法步骤：发酵培养周期结束后，对发酵菌及酶液施加直流电压0.1‑5V/cm，直流电流1‑120分钟；    （2）其产酶水平能从未施加电场时的5000 IU／mL达到6000 IU/mL；步骤三：脂肪酶酶活的测定，采用如下方法步骤：采用橄榄油乳化液测定法，配制2％( W／V)的聚乙烯醇(PVA 1750)溶液，与橄榄油按体积比3：1混合后高速搅拌3 min制得橄榄油乳化液，取5 mL乳化液与4 mL磷酸缓冲液(0．1mol／L，pH 8．0)混合，在40°C水浴中预热5 min，加入样液反应10 rnin后加入15 mL无水乙醇终止反应，以酚酞作指示剂，用0．05 tool／L的NaOH溶液滴至液体呈粉红色；（2）与空白样对比计算其酶活，在测定条件下，每分钟释放出1μmol脂肪酸的酶量定义为1个酶活单位(IU)。