SV40大T基因诱导构建先天性心脏病房间隔缺损细胞模型及其细胞库

摘要

本发明涉及用于医学研究领域的SV40大T基因诱导先天性心脏病房间隔缺损细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(-)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入经胶原酶II消化的离体传代或呈对数生长的先天性心脏病房间隔缺损细胞，使重组子与细胞的DNA整合，并扩大培养经G418筛选含阳性重组子的细胞克隆，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为SV40LT诱导先天性心脏病房间隔缺损体外研究细胞模型冻存于液氮中，为在体外从细胞水平长期研究其发病机制奠定基础。

主权项

一种用于医学研究领域的SV40大T基因诱导先天性心脏病房间隔缺损细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(‑)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag‑pcDNA3.1(‑)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入经胶原酶II消化的离体传代或呈对数生长的先天性心脏病房间隔缺损组织细胞，使重组子与细胞的DNA整合，并扩大培养经G418筛选含阳性重组子的细胞克隆，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、软琼脂集落生长、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为SV40LT抗原基因介导先天性心脏病房间隔缺损体外研究细胞模型(替代人体或动物直接试验)冻存于液氮中。