内皮祖细胞的培养方法

摘要

本发明公开了一种内皮祖细胞的培养方法，采用人外周血单个核细胞接种于I型鼠尾胶原蛋白包被的细胞培养瓶中，在培养瓶内加入DMEM培养基并置于37℃,5%CO₂,95%湿度的培养箱中培养；EPC的消化传代；然后进行EPC的细胞流式分析检测；EPC的免疫荧光检测；细胞增殖实验；单细胞成克隆实验；FITC-UEA-1胞外吸附、内吞Dil-acLDL实验检测；体外成管实验。本发明提供的EPC培养方法，简便可行，且可大大降低成本；本发明制备了高纯度的I型鼠尾胶原蛋白，将其包被细胞培养瓶用于EPC的培养，并采用了价格低廉的培养基，成功地从人外周血中培养出EPC，并通过鉴定证实其具有常规方法所培养出的EPC的表型特征和功能。

主权项

一种内皮祖细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤a. I型鼠尾胶原蛋白的制备与储存；步骤b. I型鼠尾胶原蛋白包被细胞培养瓶；步骤c.人外周血单个核细胞的分离；步骤d.将上述分离的单个核细胞接种于I型鼠尾胶原蛋白包被的细胞培养瓶中，实验同时加入阴性对照组和阳性对照组，将三组培养瓶内均加入DMEM培养基在37℃, 5%CO₂, 95%湿度的培养箱中培养；步骤e. EPC的消化传代；步骤f. EPC的细胞流式分析检测；步骤g. EPC的免疫荧光检测；步骤h.细胞增殖实验，观察EPC的增殖能力；步骤i.单细胞成克隆实验，观察EPC的增殖和自我更新能力；步骤j. FITC‑UEA‑1胞外吸附、内吞Dil‑acLDL实验检测EPC摄取FITC‑UEA‑1、Dil‑acLDL的能力；步骤k.体外成管实验，观察EPC在Matrigel上成血管样结构的能力，比较采用I型鼠尾胶原蛋白、纤维连接蛋白包被和未包被的方法培养的EPC的成管能力。