发明名称 |
黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默系统及其应用 |
摘要 |
本发明提供一种黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默系统CMV-ZMBJ VIGS,以分离自田间自然侵染玉米的CMV-ZMBJ分离物病毒粒子RNA为材料,经RT-PCR扩增其基因组RNA1、RNA2和RNA3的全长cDNA,连入pCass-Rz等植物双元表达载体,经转化农杆菌后具有侵染性,成功构建得到CMV-ZMBJ侵染性cDNA克隆pCMV101、pCMV201和pCMV301。本发明构建的CMV-ZMBJ VIGS系统适用于多种植物基因功能的研究,仅需要将待研究植物基因的部分片段插入载体即可用于基因的沉默,本发明方法简便、快速、高效、低成本、不需遗传转化。另外,CMV-ZMBJ VIGS载体可用于玉米基因功能的研究,比现在常用于玉米基因功能研究的BMV VIGS载体适用寄主范围更广泛,不仅适用于Va35,也适用于B73、郑58、Mo17等玉米。 |
申请公布号 |
CN104388463A |
申请公布日期 |
2015.03.04 |
申请号 |
CN201410601480.7 |
申请日期 |
2014.10.30 |
申请人 |
中国农业大学 |
发明人 |
周涛;王蓉;王廿;陈晖;范在丰 |
分类号 |
C12N15/82(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/82(2006.01)I |
代理机构 |
北京路浩知识产权代理有限公司 11002 |
代理人 |
王文君 |
主权项 |
黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默系统,其特征在于,由质粒pCMV2‑2b<sub>N81</sub>‑A、质粒pCMV101和质粒pCMV301组成;其中,质粒pCMV101是以侵染玉米的黄瓜花叶病毒分离物CMV‑ZMBJ的RNA1为模板,经RT‑PCR获得全长cDNA,然后克隆至pCass‑Rz载体上构建得到的;质粒pCMV301是以侵染玉米的黄瓜花叶病毒分离物CMV‑ZMBJ的RNA3为模板,经RT‑PCR获得全长cDNA,然后克隆至pCass‑Rz载体上构建得到的;质粒pCMV2‑2b<sub>N81</sub>‑A是以侵染玉米的黄瓜花叶病毒分离物CMV‑ZMBJ的RNA2为模板,经RT‑PCR获得全长cDNA,然后克隆至pCass‑Rz载体上构建得到质粒pCMV201,并将质粒pCMV201中第2659‑2752位核苷酸改造为多克隆位点,改造后的pCMV201命名为pCMV201‑2b<sub>N81</sub>‑A。 |
地址 |
100193 北京市海淀区圆明园西路2号 |