一种自体外周血淋巴细胞CIK的培养方法

摘要

本发明涉及一种自体外周血淋巴细胞的培养方法，包括如下步骤：（1）从外周血中分离单个核细胞，重悬于X-VIVO15无血清培养基中，使细胞浓度为1×10⁶个/mL，培养3天；（2）补加X-VIVO15无血清培养基至100mL，添加IL-21×10³U/mL，培养1天；（3）补加X-VIVO15无血清培养基至200-240mL，添加IL-21×10³U/mL，培养3天；（4）补加X-VIVO15无血清培养基至1000ml，添加IL-21×10³U/mL、CTLA-4mAb100ng/mL、PD-1mAb100ng/mL；（5）培养5-7天，制得自体外周血淋巴细胞。本发明通过向X-VIVO15无血清培养基中添加多种单抗及细胞因子，提高效应细胞群活化效率和扩增效率。特别是体外加载CTLA-4、PD-1抗体以覆盖所有CIK细胞表面的CTLA-4、PD-1分子，有效的降低了T调节细胞的含量，进一步提高CIK细胞对肿瘤的杀伤作用。

主权项

一种自体外周血淋巴细胞CIK的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）从外周血中分离外周血单个核细胞，重悬于X‑VIVO15无血清培养基中，使外周血单个核细胞的细胞浓度为1×10⁶个/mL，静置培养3天；（2）向步骤（1）制得的培养液中补加X‑VIVO15无血清培养基至100mL，同时添加IL‑2，使IL‑2的浓度为1×10³U/mL，静置培养1天；（3）向步骤（2）制得的培养液中补加X‑VIVO15无血清培养基至200‑240mL，同时添加IL‑2，使IL‑2的浓度为1×10³U/mL，静置培养3天；（4）将步骤（3）制得的培养液中补加X‑VIVO15无血清培养基至1000mL，同时添加IL‑2，使IL‑2的浓度为1×10³U/mL，添加CTLA‑4mAb 100ng/mL、PD‑1mAb 100ng/mL；（5）将步骤（4）制得的培养液静置培养5‑7天，制得自体外周血淋巴细胞。