一种金标银染定量检测铅离子的方法及其试剂盒

摘要

本发明公开了一种金标银染定量检测铅离子的方法及其试剂盒，特点是包括将载玻片加热清洗干燥，浸入APTES溶液中，于室温下硅烷化处理再用乙醇洗净后，于110-130℃真空干燥1-3h后得到硅烷化载玻片的步骤；将DNA和纳米金溶液混合，振荡摇匀，室温下温育加水稀释得到特异性DNA-纳米金探针溶液的步骤；将特异性DNA-纳米金探针溶液与样品溶液混合后，滴在硅烷化载玻片上室温至试样点完全干燥后，滴银染试剂暗箱静置后，立即用蒸馏水冲洗再干燥的步骤；最后进行金标银染信号的定量分析，计算得到待测样品溶液中铅离子的准确浓度的步骤，优点是具有高灵敏度、高选择性且可定量分析铅离子浓度，不仅操作简单而且可现场检测。

主权项

一种金标银染定量检测铅离子的方法，其特征在于具体包括以下步骤：(1)硅烷化载玻片的制备将载玻片置于piranha洗液中，于90‑100℃加热20‑40min后取出，用蒸馏水洗涤三次，置于N₂氛中干燥后，浸入1‑3wt％的3‑氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)溶液中，于室温下硅烷化处理2‑6h，再用乙醇洗净后，于110‑130℃真空干燥1‑3h后，得到硅烷化载玻片，所述的piranha洗液为98％的浓硫酸和30％双氧水按体积比7:3的比例混合得到；(2)特异性DNA‑纳米金探针溶液的制备a.将10μL的100μM序列为SEQ ID NO:1所示的1DNA与10μL的100μM序列为SEQ ID NO:2所示的2DNA混合均匀，在90℃水浴反应5min，自然冷却至室温后得50μM的脱氧核酶结合物溶液；b.将500μL 23.5nM的纳米金溶液与7.1μL 50μM的脱氧核酶结合物溶液混合，4℃培育22‑26h后，用蒸馏水稀释100倍，即得特异性DNA‑纳米金探针溶液；其中所述的纳米金颗粒的直径为15‑30nm，所述的特异性DNA‑纳米金探针的结构如下所示(3)特异性DNA‑纳米金探针与样品反应及银染放大将步骤(2)所得的特异性DNA‑纳米金探针溶液与样品溶液按体积比1‑3:2‑6混合，振荡摇匀10‑20min后，加入1uL的1mM EDTA二钠盐(乙二胺四乙酸二钠)，混匀后，取2‑4uL混合溶液滴在硅烷化载玻片上，于室温下至试样点完全干燥后，在试样点上滴银染试剂4‑6uL，室温下暗箱静置20‑30min后，立即用蒸馏水冲去多余银染试剂，然后干燥载玻片；其中所述的银染试剂由组分A和组分B组成，所述的组分A为含0.25g/mL的AgNO₃溶液，组分B为0.0425g/mL的氢醌、0.064g/mL的柠檬酸、0.059g/mL的柠檬酸三钠按等体积比混合而成，临用前将组分A、组分B按体积比3:100混合即得银染试剂；(4)金标银染信号的定量分析将干燥后载玻片上的金标银染试样点扫描成图片获得待测样品溶液的金标银染信号及其灰度平均值，根据金标银染信号灰度平均值与铅离子溶液浓度之间的定量关系，计算得到待测样品溶液中铅离子的准确浓度。