一种改造蛋白折叠分泌途径增强葡萄糖氧化酶分泌的方法

摘要

本发明公开了一种改造蛋白折叠分泌途径增强葡萄糖氧化酶分泌的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母中KAR2、CNE1、ERO1、SSA4、SSO2、SEC53、BMH2、HRD1、UBC1、GCN4等基因分别克隆连接到毕赤酵母表达载体pGAPZ等系列衍生质粒连接，并与GOD共表达转化入Pichia pastorisGS115菌株中，考察其效果，并通过模块化组合优化，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在3L发酵罐上酶活1972.9U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。

主权项

一种增强葡萄糖氧化酶分泌的方法，是在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达葡萄糖氧化酶基因GOD的基础上，进一步改造蛋白折叠分泌途径；所述蛋白折叠分泌途径包括三个模块，其中，模块一包括囊泡运输基因SSA4、SSO2、SEC53、BMH2，ERAD基因HRD1、UBC1；模块二包括内质网中折叠基因KAR2、CNE1、ERO1；模块三是胁迫应激反应基因GCN4；所述改造，是表达三个模块中的任意一个基因，或同时表达模块一中的任意一个基因及模块二中任意一个基因，或同时表达模块一至三中的各一个基因。