主权项 |
一种无菌培养黄粉虫的方法,其特征在于该方法的操作步骤包括:(1)初代黄粉虫材料的处理:选取生长健壮的黄粉虫幼虫,用无菌水进行表面清洗3次,用无菌滤纸片吸干虫体上的水分,在75%消毒酒精中消毒5‑15秒钟,在无菌滤纸片上挥干酒精,处理好的幼虫作为父代材料;(2)无菌麸皮培养基制备:取30g麸皮装在500ml罐头瓶内,封好瓶口,于0.11MPa,121℃灭菌60min,冷却备用;(3)黄粉虫无菌培养:将制备好的初代黄粉虫按每瓶10只的量分别置于无菌麸皮培养基罐头瓶中,15‑25℃培养至幼虫化蛹;将蛹无菌操作转移至新鲜无菌麸皮培养基中,待蛹羽化后再转移至新鲜无菌麸皮培养基中,交配后的成虫转移至无菌铁丝网筛内,筛子下面放一张无菌纸,收集成虫产下的卵即为子一代卵;子一代卵置于无菌麸皮培养基中继续培养至成虫,筛选无菌虫体,用同样的方法产卵,为子二代卵;如此逐代稀释,子二代卵培养至成虫,检测到的无菌率达90%;子三代卵培养至成虫,检测到的无菌率达95%;子四代卵培养至成虫,检测到的无菌率达100%;得到的无菌虫体可以根据实验需要,继续培养至实验需要的虫龄;(4)无菌成虫的检测和数量统计:将无菌培养的刚羽化的黄粉虫成虫分别无菌操作转移至含水量50%的无菌新鲜麸皮培养基中,25℃培养10天,无微生物生长起来的虫体为无菌;统计无菌成虫数量。 |