一种利用枯草芽孢杆菌生产红色素的方法

摘要

本发明属于微生物发酵领域，涉及利用枯草芽孢杆菌液体发酵制备红色素的工艺方法以及红色素粗产品的纯化精制技术。本发明所用菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HJ，保藏编号为CGMCCNo.5701。本发明提供的发酵生产红色素的方法，包括如下步骤：（1）种子液的制备：将菌种枯草芽孢杆菌CGMCCNo.5701活化培养后获得种子液；（2）将种子液接入发酵培养基进行发酵，所述发酵为摇瓶发酵或深层液体通风发酵；（3）提取枯草芽孢杆菌发酵液中的红色素。通过摇瓶发酵方法红获得的红色素产量达到1.8g/L以上。通过深层液体通风发酵方法获得的红色素产量为2.4g/L。

主权项

一种利用枯草芽孢杆菌生产红色素的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)种子液的制备：将菌种枯草芽孢杆菌CGMCCNo.5701活化培养后获得种子液；(2)将种子液接入发酵培养基进行发酵，所述发酵为摇瓶发酵或深层液体通风发酵；(3)枯草芽孢杆菌发酵液中红色素的提取；所述摇瓶发酵的方法包括以下步骤：将种子液以2‑10％的接种量接入发酵培养基，250ml三角瓶装液量为30‑60ml，三角瓶塞采用乳胶塞，培养温度30‑35℃，转速160‑180r/min摇床培养12‑15h，而后于24‑29℃恒温箱静置培养106h；所述深层液体通风发酵的方法包括以下步骤：红色素的气升式发酵：将气升式反应器装入10L液体发酵培养基，通过发酵罐夹套升温到95℃时，改为将蒸汽直接通入到液体培养基中，121℃灭菌30min，然后将温度逐渐降至32‑35℃，将种子液以3‑8％的接种量接入培养基中，初始发酵12‑15h，发酵控制条件为35‑37℃，pH7.5‑8.0，通气量为0.6vvm；发酵12‑15h后将发酵温度调为25‑26℃，通气量调节至0.3vmm，pH调节至8.0；发酵72h，补加浓度1g/L的葡萄糖500ml；所述发酵液中红色素的提取方法包括以下步骤：发酵液10000r/min离心10min，洗涤沉淀得菌体，用80％的pH4.5的酸性乙醇作为溶剂，然后用300W超声细胞破碎仪，破碎温度35℃，超声时间为30min；然后将破碎液在37℃下震荡抽提40min，10000r/min离心5min，超声振荡处理后得红色素溶液；接着采用旋转蒸发仪真空浓缩，温度控制为55‑65℃，当浓缩至色素溶液粘稠时，取出色素浓缩液，‑20℃冷冻过夜，然后将结冰的色素置于真空冷冻干燥机中，控制真空度为30‑50Pa，温度为‑35℃，冷冻时间15‑18h；取出即为干燥好的红色素制品。