一种小球藻抑菌肽的制备方法

摘要

本发明提供了一种小球藻抑菌肽的制备方法。本发明以小球藻为原料，利用超低温冷冻、低温超高压连续流细胞破碎结合超声波处理工艺，对小球藻有效破壁获得可溶性蛋白质，进而用生物酶法获得抑菌效果明显的抑菌肽。由于小球藻具有细胞壁异常坚固，壁内蛋白含量高的特点，发明的技术要点在于超低温冷冻、低温超高压连续流细胞破碎结合超声波处理工艺对小球藻进行处理，对小球藻有效破壁增加可溶性蛋白质含量，通过合适酶的选取与水解度的控制可以获得抑菌效果好的抑菌肽。

主权项

一种小球藻抑菌肽的制备方法，所述方法包括：（1）取小球藻粉，加入适量水混合均匀，在‑50～‑40℃下冷冻2～3h后，室温下融化，补加水至料液比为1：20～40，放入超声波萃取仪中，在20～30℃、20～30KHz下超声波处理10～20min后，再采用低温超高压连续流细胞破碎仪，在4～6℃、180～200Mpa压力下处理5～8min后，在40～60℃、20～30KHz下超声提取2～3小时，提取后离心，得到上清液1和滤渣1；（2）滤渣1按步骤（1）方法重复提取3次，依次得到上清液2、上清液3和上清液4，合并上清液1～4，得到小球藻提取液；（3）将小球藻提取液浓缩，加入足量80～95%乙醇溶液，在‑4℃条件下静置12～24h，离心，取沉淀物，用水溶解后浓缩，冷冻干燥得小球藻蛋白；（4）取小球藻蛋白，加入酶解缓冲液中至其质量浓度为5～10%，胰蛋白酶添加为1000～2000U/mL，在pH8.0、37℃下进行酶解反应40～60min后，结束酶解反应，酶解液经聚砜膜进行膜过滤，收集分子量在1～20kD的浓缩液，得到所述小球藻抑菌肽。