一种产气荚膜梭菌等温PCR现场快速检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种产气荚膜梭菌等温PCR现场快速检测试剂盒，由一套引物、10倍环介导等温扩增反应液、DNA聚合酶、阳性对照、阴性对照和显色剂组成；所述的一套引物是由一对引物和一对内引物组成。采用本发明可以定性定量检测产气荚膜梭菌。本发明利用Bst DNA酶的链置换特性，设计4条引物，识别靶序列的6个区域，在等温条件下生成大量重复的茎环状结构，在定性检测时不需任何特殊设备，只需眼观反应管道颜色变化即可判定，因此具有特异性、敏感性高和检测时间比普通PCR短、适用于养殖场场现场的快速检测等特点。

主权项

一种产气荚膜梭菌等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于，由一套引物、10倍环介导等温扩增反应液、DNA聚合酶、阳性对照、阴性对照和显色剂组成；所述的一套引物是由一对引物和一对内引物组成，其序列为：引物1：AGAGAACATGCATGAGCT引物2：CTCTCCAAGATAGAATGTAGCT内引物1：TCTGTATCAGGATCCCAGAAATGATACTTATCCAGATTATGATAAGAACG内引物2：ATACCTGACACAGGGGAATCACTTTGCCATTCATATCTAGCT其中，所述的一对引物与一对内引物的摩尔数之比为1∶6～9；所述的DNA聚合酶为具有链置换作用的Bst DNA聚合酶，活力为8个活性单位/微升；所述的阳性对照为含有插入产气荚膜梭菌α毒素基因一段特异序列的阳性质粒，环介导等温扩增反应扩增区位于该特异序列中，其浓度为10⁷拷贝/μL；所述的阴性对照为灭菌双蒸水；所述的显色剂为20倍SYBR Green I。