固定有抗原的免疫荧光载片的制备方法和由该方法制备的免疫荧光载片

摘要

制备固定有抗原的免疫荧光载片的方法，所述方法包括：将C反应蛋白固定在载片上制备蛋白芯片；将能够特异结合靶蛋白的抗体与链霉亲和素混合从而给抗体标记上荧光纳米颗粒；通过竞争混合与抗体免疫反应，利用荧光照相机分析，其中C反应蛋白在载片上的固定包括：用3-氨丙基三甲氧基硅烷修饰载片来制备经过修饰的载片；将3-氨丙基三甲氧基硅烷修饰的载片水合；利用戊二醛溶液活化修饰过的载片；将C反应蛋白以0.01-0.5mg/ml的浓度溶解在30-70mM磷酸盐缓冲液(pH 6.5-7.8)中从而制备用于固定的抗原溶液；将容纳载片的培养皿放在点样模板上，在点样点上加1-100μl抗原溶液；和在如上制备的载片上反应1-6小时以便固定抗原。利用所述方法制备的免疫荧光载片。

主权项

制备固定有抗原的免疫荧光载片的方法，所述方法包括：将C反应蛋白固定在载片上制备蛋白芯片；用荧光纳米颗粒标记能够特异结合C反应蛋白的抗体；将由标本获得的靶蛋白与荧光标记抗体混合，使混合液与载片上固定的抗原反应，以及通过利用荧光显微镜测量荧光强度或荧光颗粒的数量进行分析，其中用荧光纳米颗粒对抗体进行的标记包括：将链霉亲和素修饰的荧光二氧化硅纳米颗粒溶液超声处理10‑30分钟；取所得溶液200‑600μl加入1‑3ml 0.05‑0.25mg/ml生物素化抗体溶液中，室温反应1‑3小时，期间以30分钟的间隔于30‑200rpm的低速进行搅拌，每次搅拌2‑7分钟；反应溶液在3‑10℃的温度下以7000‑17000rpm的速率离心20‑40分钟，弃去上清液，收集沉淀；用30‑70mM磷酸盐缓冲液(pH 6.5‑7.8)将沉淀物洗一到五次，每次洗涤后，在和以上描述的相同的条件下离心，获取沉淀物；和将沉淀物重悬于0.4‑1.2ml 30‑70mM磷酸盐缓冲液(pH 6.5‑7.8)中。