一种高效水解鞘脂制备溶血鞘脂的方法

摘要

本发明公开了一种高效水解鞘脂制备溶血鞘脂的方法。首先，本发明对于鞘脂神经酰胺N-去酰基化酶SCDase G8进行了改造，去除了N末端信号肽并截短了C末端，得到了高活力的SCDase G8的突变体SCDase G8-del，并针对宿主细胞对编码基因进行了密码子优化；通过蛋白表达条件的优化，提高了SCDase G8-del的可溶性表达量。在此基础上建立了一种利用SCDase G8-del高效水解鞘脂制备溶血鞘脂的方法。该方法优化了高活力的SCDase G8-del的可溶性表达条件，优化了反应体系中金属离子浓度，优化了表面活性剂的种类和浓度，提高了溶血鞘脂产率，并且优化后的反应体系对高浓度的鞘脂和不同种类的鞘脂都有较好的水解作用。

主权项

一种高效水解鞘脂制备溶血鞘脂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1)构建SCDase G8截短突变体SCDase G8‑del的表达载体；2)高效表达重组蛋白SCDase G8‑del；3)利用步骤2)中的重组蛋白SCDase G8‑del水解鞘脂制备溶血鞘脂。其中，所述的突变体SCDase G8‑del是去除了N端的信号肽，截短了C端30kDa，且对其编码基因依据大肠杆菌中密码子使用频率进行了密码子优化的突变体，其基因序列如SEQ ID NO:1所示；蛋白的氨基酸序如SEQ ID NO:2所示。