原核细胞中高效表达有活性的细胞周期检测点激酶2及其分离纯化方法

摘要

本发明提供了一种优化的CHK2 kinase Domain蛋白的分离纯化方法，所述CHK2 kinase Domain蛋白是CHK2截短至201位至531位氨基酸的片段，该方法中运用载体pGEX-6p-1和EcoRI、XhoI酶切位点以及BL21(DE3)表达纯化所述CHK2 kinase Domain蛋白，该方法中蛋白的纯化工艺流程简单，节约科研成本，蛋白的活性大幅度提高，并且能广泛应用于酶学，晶体学研究，以及高通量抑制剂筛选中。

主权项

具有CHK2蛋白酶活性的CHK2Kinase Domain蛋白的制备方法，包括将CHK2Kinase Domain蛋白的编码核酸序列与pGEX系列载体可操作性的连接，得到重组表达载体，将该重组表达载体转化到宿主细胞中，然后诱导宿主细胞中CHK2Kinase Domain蛋白的表达，离心收集宿主细胞，超声破碎宿主细胞收集上清，经GST亲和层析和分子筛层析后即得纯化的CHK2Kinase Domain蛋白。