一种复叶耳蕨愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法

摘要

本发明研究了一种复叶耳蕨愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养等步骤。本发明可以快速获得大量的复叶耳蕨细胞，操作简单可控，细胞繁殖率高，生长周期短，可以无限度的提供制药原料，有助于复叶耳蕨药用成份的有效开发和利用。

主权项

一种复叶耳蕨愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、悬浮细胞的培养等，主要步骤如下：（1）取复叶耳蕨的幼嫩叶片，按照常规的消毒方法对其进行灭菌处理；（2）将步骤（1）灭菌处理过的复叶耳蕨叶片接入培养基配方为Nitsch+TDZ0.2mg/L+IBA1‑3mg/l+10%椰乳诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5‑6，光照1000lx，温度15℃；（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织放入液体培养基Nitsch+2，4‑D0.1‑0.2mg/L+TDZ0.1‑0.2mg/L+EDTA+消泡剂进行悬浮细胞培养，附加蔗糖30g/L，PH5.8，光照1500lx，温度15℃；（4）取步骤（3）悬浮培养出来的细胞接入固体平板，筛选次生代谢物质含量高的细胞株。