一种利用UPLC快速测定豆制品中6种大豆异黄酮的方法

摘要

本发明公开了一种利用UPLC快速测定豆制品中6种大豆异黄酮的方法，属于分析化学技术领域。测试豆制品种类包括豆浆、豆腐、素鸡、豆干、百叶、腐竹等，测定大豆苷，大豆苷元，黄豆黄苷，黄豆黄素，染料木苷，染料木素6种大豆异黄酮。首先用甲醇溶液对豆制品中的大豆异黄酮进行提取，收集上清液后，残渣再用甲醇重复提取2次，合并上清液，进行UPLC检测。本发明采用UPLC达到对豆制品中主要的6种大豆异黄酮的组成和含量的快速测定，本方法样品前处理简单，分析速度快，重复性、准确性高，为豆制品质量评价与控制提供高效准确的分析方法手段。

主权项

一种利用UPLC快速测定豆制品中6种大豆异黄酮的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）标准品：大豆苷、大豆苷元、黄豆黄苷、黄豆黄素、染料木苷、染料木素6种标准品均购自阿拉丁公司；（2）样品前处理：取 0.1 mL豆浆加入0.9 mL甲醇，或0.1g固体豆制品加入1 mL甲醇，超声53kHz提取5 min，涡旋混匀，室温下4000 r/min 离心 3 min，取上清，残渣再用甲醇重复提取2次，合并上清，氮气吹干，过0.22 μm滤膜，待测；（3）色谱条件：色谱柱：Kinetex‑C18，2.1 mm×100 mm，1.7 μm，流动相为乙腈A相及0.1 %甲酸B相，流动梯度洗脱程序：0‑0.5 min：10 % A+90 % B；0.5‑10 min：10 % A+90% B ‑ 45% A+55% B；10‑13 min：45% A+55% B ‑ 100 % A；流速0.3 mL/min，柱温45 ℃，紫外检测波长260 nm；进样量 1 μL；（4）大豆异黄酮含量测定方法的建立：分别称取大豆苷，大豆苷元，黄豆黄苷，黄豆黄素，染料木苷，染料木素6种标准品各5 mg，精确到0.01mg，置于25 mL容量瓶中，用甲醇与水的体积比为3:2的甲醇‑水溶液定容，配成混合标准样品储备液，于‑20℃保存；用甲醇‑水溶液逐级稀释使6种大豆异黄酮含量分别为0.15‑20 mg/L；然后以每个浓度下的标准溶液所得的260nm处积分峰面积为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，分别建立标准曲线；在检测样品时，根据样品所得的260nm处积分峰面积，分别从标准曲线中读出样品中6种大豆异黄酮的含量。