一种香椿叶中没食子酸及其甲酯的同时制备及检测方法

摘要

本发明一种香椿叶中没食子酸及其甲酯的同时制备及检测方法，属于中药技术领域。采用的制备方法通过提取、萃取和两次柱色谱即可从中药香椿叶中同时获得没食子酸和没食子酸甲酯，避免使用多种柱色谱填料和反复柱层析，操作简便，时间和试剂消耗低；采用的检测方法利用实验室常备的高效液相色谱仪，分离度、准确性、重现性、稳定性等各种方法学指标均符合含量测定的要求，可靠性高，可用于分析不同来源、批次的香椿叶药材中没食子酸和没食子酸甲酯的含量，能满足药理活性测试以及对该中药进行常规质量控制的需要。

主权项

一种香椿叶中没食子酸及其甲酯的同时制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：1）香醇叶细粉100g用90%乙醇700mL超声提取3次，每次1.5小时，合并提取液，50^oC以下减压回收溶剂，得浸膏；2）加入6倍量水混悬，以等量水饱和正丁醇萃取3次，合并萃取液，减压回收溶剂，所得正丁醇萃取物；3）正丁醇萃取物干法上样载入硅胶柱分离，萃取物与硅胶质量比例为1:70，以二氯甲烷‑甲醇‑水‑甲酸体积比例为100:12:2:1等度洗脱，以硅胶质量:流分体积为1:1.2 g/ml收集一份流出液，收集第6～8份流出液，合并，减压回收溶剂，得初步纯化物；4）将初步纯化物:甲醇以比例为1:30g/mL溶解，溶液载入制备型高效液相色谱仪进行分离；仪器：Waters制备型HPLC仪，由2545型二元梯度仪、2767型样品控制器、2489型紫外可见检测器、515型泵、泵控制器Ⅱ以及10000:1分流器组成；色谱柱：Waters SunFire Prep C₁₈；流动相为甲醇‑0.2%三氟乙酸水溶液体积比例为10%:90%；进样量为4mL；流速为20mL/min；紫外检测波长为270nm；分别收集7min～9min和10min～12min两个流份，将流份分别于50^oC下减压浓缩至干，即得没食子酸和没食子酸甲酯；其中所述的没食子酸及其甲酯的同时检测方法，按照下述步骤进行：    （1）对照品溶液制备：    将没食子酸:没食子酸甲酯:甲醇以比例为1 mg:1 mg:2.5mL溶解得对照品母液；以没食子酸乙酯为内标物，按比例为1 mg:2mL溶于甲醇，得内标物母液；取适量对照品母液和内标物母液混合，加入甲醇将对照品母液稀释至原浓度的1/2、1/5、1/10、1/20、1/50和1/100，将内标物母液稀释至原浓度的1/20，得不同浓度的6份混合对照品工作溶液；另将内标物母液用甲醇稀释到原浓度的1/20，得到含内标物的甲醇溶液；    所述的没食子酸、没食子酸甲酯和没食子酸乙酯的化学结构和分子量如下所示：    （2）样品溶液制备：    精密称取香椿叶粉末，加入含内标物的甲醇溶液，比例为1 g:20mL，在600W，40kHz的超声辅助提取45～60分钟，冷却至室温，摇匀，混悬液通过0.45μm微孔滤器，收集续滤液；    （3）高效液相色谱分析条件：    流动相由A和B组成，其中A为乙腈，B体积分数为0.1%～0.2%乙酸水溶液；流速为0.9 mL/min～1.0mL/min；色谱柱填料为5μm的C₈或C₁₈；色谱柱尺寸为内径4.6mm、长度150mm～250mm；柱温为30^oC～40^oC；进样量为5～10μL；检测波长为270nm；梯度洗脱程序以体积百分比计算为0min，A：3%～5%、B：97%～95%；18min，A：30%～35%、B：70%～65%。