番茄种传病原多重PCR检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明属于生物技术领域，涉及一种番茄病害的检测方法，主要针对番茄的三种重要种传病原马铃薯纺锤块茎类病毒、凤果花叶病毒和烟草环斑病毒的同时检测。一种番茄种传病原多重PCR检测试剂盒，番茄种传病原为马铃薯纺锤块茎类病毒、凤果花叶病毒或烟草环斑病毒，其主要特点在于包括以下组分：RT-PCR buffer；马铃薯纺锤块茎类病毒PSTVd上下游引物，凤果花叶病毒PepMV上下游引物，烟草环斑病毒TRSV上下游引物；反转录酶及DNA聚合酶Mix；无RNA酶的去离子水；马铃薯纺锤块茎类病毒、凤果花叶病毒和烟草环斑病毒无侵染活性的阳性对照。本发明的优点是能同时检测番茄3种重要种传病原，快速准确，避免了常规PCR检测的重复操作。

主权项

一种番茄种传病原多重PCR检测试剂盒，番茄种传病原为马铃薯纺锤块茎类病毒、凤果花叶病毒或烟草环斑病毒，其特征在于包括以下组分：RT‑PCR buffer，2×RT‑PCR buffer，100‑250μL；RT‑PCR扩增引物为马铃薯纺锤块茎类病毒PSTVd上游引物，浓度为10μmol/L，10‑30μL；马铃薯纺锤块茎类病毒PSTVd下游引物，浓度为10μmol/L，10‑30μL；凤果花叶病毒PepMV上游引物，浓度为10μmol/L，10‑30μL；凤果花叶病毒PepMV下游引物，浓度为10μmol/L，10‑30μL；烟草环斑病毒TRSV上游引物，浓度为10μmol/L，10‑30μL；烟草环斑病毒TRSV下游引物，浓度为10μmol/L，10‑30μL；反转录酶及DNA聚合酶Mix，20μL；无RNA酶的去离子水，100μL‑1mL；阳性对照，马铃薯纺锤块茎类病毒PSTVd、凤果花叶病毒PepMV和烟草环斑病毒TRSV无侵染活性的阳性对照各20‑60μL；所述的RT‑PCR扩增引物为：马铃薯纺锤块茎类病毒PSTVd上游引物为：5′‑ATTCCCGCCGAAACAGG‑3′；PSTVd下游引物为：5′‑CCCGAAGCAAAGAAGATAGAGAAA‑3′；凤果花叶病毒PepMV上游引物为：5′‑ATGAGGTTGTCTGGTGAAGGTC‑3′；PepMV下游引物为：5′‑AATTCCGTGCACAACTATGATTC‑3′；烟草环斑病毒TRSV上游引物为：5′‑CTTGCGGCCCAAATCTATAA‑3′；TRSV下游引物为：5′‑ACTTGTGCCCAGGAGAGCTA‑3′。