一种建立鹅胚上皮细胞系的方法及建立的鹅胚上皮细胞系

摘要

本发明公开了一种建立鹅胚上皮细胞系的方法及建立的鹅胚上皮细胞系。本发明涉及一种建立鹅胚上皮细胞系的方法，其特征在于将原代鹅胚胎组织贴壁法、差速酶消化法和单克隆筛选方法相结合，优化了原代培养条件。此方法操作方法简便，便于推广应用。本发明还涉及所述方法建立的鹅上皮细胞系，其保藏号为CCTCC NO:C2014137，该细胞系的建立解决了目前尚未有完善的鹅源细胞系的问题。本发明还涉及一种用于培养和/或增殖小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒及I型鸭肝炎病毒及新型鸭肝炎病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的待感染宿主细胞即为或包括所述的鹅胚上皮细胞系。本发明，验证了所述鹅胚上皮细胞系对小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒及I型鸭肝炎病毒及新型鸭肝炎病毒感染的敏感特性。

主权项

一种建立鹅胚上皮细胞系的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)原代细胞贴壁培养：无菌收集鹅胚组织，加入浓度为PBS 10mL，清洗5～10分钟，弃去PBS后，加入10～20mL含有抗生素的消毒液处理5～10分钟，取出鹅胚组织并剪成0.5～1.5mm3的组织块，将组织块平贴入培养板的孔底，每孔一块，向培养孔加入2～3mL培养液I，置于37℃、5％CO2条件下培养至组织块完全贴壁，然后加入培养液I至2～3mL，在37℃、5％CO2条件下培养，培养期间更换培养液；(2)传代培养：贴壁培养的细胞长成单层细胞后，弃去培养液I，用胰酶消化处理，大部分成纤维样细胞脱落，弃去脱落的细胞，在6孔板加入细胞培养液II 2‑3mL，置于37℃、5％CO2条件下培养；(3)鹅上皮细胞系的单克隆筛选：以传代培养法连续传代至第5代后，将细胞用胰酶消化处理至单个细胞，然后按照平均1.5个细胞/孔的密度接种到培养板，标记接种单个细胞的孔，待所述单个细胞的孔中的细胞长成上皮样细胞克隆团即得到鹅上皮细胞系的单克隆；所述培养液I为含有体积比10％胎牛血清，1％‑2％的鹅血清及0.2％‑1％鹅胚尿囊液的DMEM；所述培养液II为含有体积比5％新生牛血清的DMEM。