一种适用于苦苣苔科植物基因组大小的测定方法

摘要

本发明公开了一种适用于苦苣苔科植物基因组大小的测定方法。苦苣苔科植物的新鲜嫩叶；选择番茄为主要内参，水稻为第二内参，并依据番茄基因组大小为标准对水稻基因组大小进行重新校对；按照1ml核提取缓冲液LB01中加入20mg嫩叶的量，分别将目的植物和内参物种的嫩叶加入核提取缓冲液LB01中，然后将嫩叶切碎，用50μm孔径的过滤网过滤获得细胞核悬液，置于冰上备用；再用RNA消化酶消化细胞核悬液中的RNA，然后加入碘化丙啶荧光染色，终浓度为100μg ml^-1，避光染色，染色时间为40min；然后再应用流式细胞仪测定目的植物的基因组大小。本发明能为多种苦苣科植物测定了准确的基因组大小，变异系数CV低于5％，该方法重复性好，操作简单，符合苦苣科植物学方面的研究。

主权项

一种适用于苦苣苔科植物基因组大小的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：材料准备：苦苣苔科的目的植物的新鲜嫩叶；内参选择：仪器调试后进行样品荧光强度及基因组大小的预测，根据预测基因组大小选择番茄为主要内参，水稻为第二内参，并依据番茄基因组大小为标准对水稻基因组大小进行重新校对；制备细胞核悬液：目的植物和内参物种，按照1ml核提取缓冲液LB01中加入20mg嫩叶的量，分别将目的植物和内参物种的嫩叶加入核提取缓冲液LB01中，然后将嫩叶切碎，用50μm孔径的过滤网过滤获得细胞核悬液，置于冰上备用，所述的核提取缓冲液LB01的配方为：15mM Tris、2mM Na₂EDTA、0.5mM spermine.4HCl、80mM KCl、20mM NaCl、15mMβ‑mercaptoethanol、0.1％(v/v)Triton X‑100，pH7.5；再用RNA消化酶消化细胞核悬液中的RNA，RNA消化酶终浓度为50μg ml^‑1；然后加入碘化丙啶荧光避光染色；最后应用流式细胞仪测定目的植物的基因组大小。