一种检测PML-RARa融合基因mRNA表达量的试剂盒

摘要

本发明涉及一种检测PML-RARa融合基因mRNA表达量的试剂盒，属于生物技术领域，所述试剂盒包括PML-RARa L融合基因体系、PML-RARa V融合基因体系和PML-RARa S融合基因体系中的至少一种体系以及内参基因ABL体系，所述体系均包括上游引物、下游引物和Taqman荧光探针。PML-RARa融合蛋白作为一种变异的维甲酸受体，相较于野生型RARa蛋白具有不同的DNA特性，是RA信号的抑制物，通过不同的途径成为内在而有效的RARa靶基因转录因子抑制物。因此，采用敏感性及特异性均较高的荧光定量PCR检测PML-RARa融合基因mRNA水平，其检测结果的特异性和敏感度均显著提高，为预测急性早幼粒细胞性白血病的预后以及化疗方案的确定提供了一种全新的快速简便的基因诊断技术。

主权项

一种检测PML‑RARa融合基因mRNA表达量的试剂盒，包括检测用引物、荧光探针、cDNA第一链合成试剂、荧光定量PCR混合液、阴性对照和阳性对照，其特征在于，所述检测用引物、荧光探针包括PML‑RARaL融合基因引物、PML‑RARa V融合基因引物和PML‑RARa S融合基因引物中的至少一种和内参基因ABL引物及Taqman荧光探针，所述试剂盒还包括内部阳性控制序列、内部阳性控制序列的引物及内部阳性控制序列Taqman荧光探针，其中：PML‑RARa L融合基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；PML‑RARa L融合基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；PML‑RARa L融合基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:3所示；PML‑RARa V融合基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:4所示；PML‑RARa V融合基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:5所示；PML‑RARa V融合基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:6所示；PML‑RARa S融合基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:7所示；PML‑RARa S融合基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:8所示；PML‑RARa S融合基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:9所示；ABL基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:10所示；ABL基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:11所示；ABL基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:12所示；内部阳性控制序列如序列表中SEQ ID NO:13所示；内部阳性控制序列的上游引物如序列表中SEQ ID NO:14所示；内部阳性控制序列的下游引物如序列表中SEQ ID NO:15所示；内部阳性控制序列Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:16所示；所述cDNA第一链合成试剂含有MgCl₂、逆转录酶缓冲液、dNTPs、RNA酶抑制剂、Oligo(dT)₁₅、AMV逆转录酶和无RNase去离子水；所述荧光定量PCR混合液含有PCR预混合液、Mg²⁺、dNTPs、dUTP、Taq酶、UNG酶和无RNase去离子水。