一种在钛表面构建层粘连蛋白/肝素/SDF-1α抗凝及诱导内皮化多功能层的方法

摘要

本发明公开了一种在钛表面构建层粘连蛋白/肝素/SDF-1α抗凝及诱导内皮化多功能层的方法。首先利用PLL能够与碱活化的Ti表面发生静电结合作用的特性，构建氨基化的Ti表面。然后利用Ln和Hep之间的特异性结合作用，制备出Ln/Hep复合物，并通过EDC/NHS/MES偶联剂将Ln/Hep复合物共价固定于氨基化Ti表面。最后利用SDF-1α能够与Hep发生特异性结合的作用，将SDF-1α装载于Ln/Hep修饰的表面，从而构建具有抗凝/诱导内皮再生的生物功能性微环境。本发明在钛表面构建具有抗凝和诱导内皮再生能力的多功能层，显著改善了材料的血液相容性和损伤内皮修复能力。

主权项

一种在钛表面构建层粘连蛋白/肝素/SDF‑1α抗凝及诱导内皮化多功能层的方法，其步骤包含： A、碱热活化：纯钛经表面抛光和清洗处理后，浸入浓度为1～5mol/L的NaOH溶液中，在60～90℃条件下反应8～16小时，单蒸水超声清洗后，浸入双蒸水中，60～90℃条件下反应8～12小时，单蒸水超声清洗后，37℃烘干； B、表面氨基化：将A步骤中碱热活化的样品浸泡于0.5～3mg/ml的多聚赖氨酸(PLL，MW150～300KDa)溶液中，在4℃条件下静置反应8～24小时，然后用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗样品，保存待用； C、层粘连蛋白/肝素的共固定：首先将浓度为30～300μg/ml的层粘连蛋白溶液与浓度为3～10mg/ml的肝素钠溶液等体积共混，37℃条件下静置孵育1～3小时；配置摩尔比为2:1:1的EDC/NHS/MES(0.05mol)缓冲液，以1:10的体积比加入至层粘连蛋白/肝素的混合液中，室温下静置1～5分钟；然后将B步骤中涂覆有PLL的钛片浸泡于上述层粘连蛋白/肝素钠混合液中，37℃条件下静置反应3～6小时；最后用PBS漂洗样品，保存待用； D、SDF‑1α的装载：将C步骤获得的样品浸入50～500ng/ml的SDF‑1α溶液中，在4℃条件下静置反应8～24小时，PBS漂洗后即得目标物。