一种聚乙二醇偶联结合超滤离心分离富集糖肽的方法

摘要

本发明涉及糖肽的富集方法，具体地说是一种聚乙二醇偶联结合超滤分离富集糖肽的方法；N-连接糖蛋白质经过酶解产生的肽段混合物中加入高碘酸，糖链上的顺式邻二醇经氧化生成醛基，通过反相色谱除盐去除多余的高碘酸；向氧化后的肽段混合物中加入单甲氧基聚乙二醇酰肼（mPEG-Hz），在乙酸－乙酸钠缓冲液中糖肽与聚乙二醇偶联；将反应产物加入超滤离心管样品池中，经过清洗和离心过滤将糖肽和非糖肽分开；糖肽保留在滤膜内，非糖肽离心到滤膜外；向样品池中再加入肽N-糖苷酶F（PNGaseF）的碳酸氢铵缓冲液，酶解后将肽段从其糖基化位点处酶切下来，经过离心即可获得含糖基化位点的肽段。本发明的优点为：是一种普适性的糖肽富集方法，具有较好的选择性，操作步骤简单，非特性吸附的清洗比较容易，成本较低。

主权项

一种聚乙二醇偶联结合超滤离心分离富集糖肽的方法，其特征在于：1）N‑连接糖蛋白质经过酶解产生的肽段混合物中加入高碘酸，糖链上的顺式邻二醇经氧化生成醛基，通过反相色谱除盐去除多余高碘酸；2）向氧化后的肽段混合物中加入单甲氧基聚乙二醇酰肼（mPEG‑Hz），在乙酸‑乙酸钠缓冲液中糖肽与聚乙二醇偶联；3）将反应产物加入超滤离心管样品池中，经过清洗和离心过滤将糖肽和非糖肽分开；糖肽保留在滤膜内，非糖肽离心到滤膜外；4）向样品池中再加入肽N‑糖苷酶F（PNGase F）的碳酸氢铵缓冲液，酶解后将肽段从其糖基化位点处酶切下来，经过离心即可获得含糖基化位点的肽段；步骤2）中聚乙二醇偶联反应的具体过程为：肽段混合物中加入含有1‑5mg/mL单甲氧基聚乙二醇酰肼的pH=4.5—6.5乙酸—乙酸钠缓冲溶液中，在室温下振荡反应6‑24小时，所述单甲氧基聚乙二醇酰肼的分子量为10,000‑20,000Da。