一种拉曼可视化快速检测藻毒素高灵敏纸的制备方法及检测方法

摘要

一种拉曼可视化快速检测藻毒素高灵敏纸的制备方法及检测方法，属于纳米材料与生物化学检测技术领域。本发明包括：藻毒素抗体的制备，球形及星形纳米粒子的制备、具有拉曼信号的金标抗体的制备、纸基拉曼试纸条的组装以及在藻毒素检测中的应用等步骤。本发明提供了一种高灵敏纸基拉曼可视化快速检测藻毒素的方法，通过合成具有拉曼信号的纳米粒子，并标记藻毒素抗体，用于免疫金标记技术（ICA）结合拉曼检测仪器对藻毒素进行高灵敏检测。

主权项

一种拉曼可视化快速检测藻毒素高灵敏纸的制备方法，其特征在于步骤为：（1）制备具有拉曼信号的金标记抗体：首先将拉曼信标分子4‑氨基苯硫酚和金纳米粒子过夜反应，利用4‑氨基苯硫酚的巯基和金表面形成稳定的金硫键；过夜反应后，离心，用pH8.0的硼酸缓冲液重悬，再加入藻毒素抗体，使得藻毒素抗体终浓度为10µg/mL；振荡标记2h，加入牛血清白蛋白封闭未反应的位点2h，终浓度0.5%；离心，后加入PBS重悬到原始体积；（2）试纸条的制备：将步骤（1）制备好的具有拉曼信号的金标记抗体，均匀浸泡到金标结合垫上，然后烘干；同时在塑料底板上依次组装样品垫玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸，将金标结合垫组装到塑料底板上使之在样品垫玻璃纤维膜和硝酸纤维素膜之间相互叠加1mm；将藻毒素抗原MC‑LR‑BSA及羊抗鼠二抗依次喷到硝酸纤维膜上烘干2h，作为检测线及质控线；然后将组装好的片状试纸条在切条机器上切成宽3mm每条的单个试纸条，组装到塑料卡壳中，单个封装，干燥保存。