一种基于同源重组的细菌基因点突变分子克隆技术

摘要

本发明涉及一种基于同源重组的细菌基因点突变分子克隆技术，该技术通过在目的原始菌基因A与其相邻基因B间插入基因片段C，插入的基因片段的插入位点在目的基因A和其相邻基因B的启动子间，且不影响2个基因的表达再以质粒为载体，经双酶切及连接后转化将上述的两个片段和基因片段C连接获得一个新的质粒，最后将新的质粒转化至原始菌。实现在原始菌内直接对目的基因进行点突变，且不改变基因的生存环境，不影响基因的表达。

主权项

一种基于同源重组的细菌基因点突变分子克隆技术，其特征在于在目的原始菌基因A与其相邻基因B间插入基因片段C，插入的基因片段的插入位点在目的基因A和其相邻基因B的启动子间，且不影响2个基因的表达；然后采用PCR方法扩增2个片段，其中一个片段为：目的基因内部A开始到目的基因A启动子与B基因启动子之间的上游片段；另一片段为：A基因启动子与B基因启动子之间的开始到B基因内部的下游片段；再以质粒为载体，经双酶切及连接后转化将上述的两个片段和基因片段C连接获得一个新的质粒，该质粒含“上游片段‑基因片段C‑下游片段”；最后将新的质粒转化至原始菌。