一种从赭色小莫勒菌中高效提取3β-乙酰基-15α，22-二羟基何帕烷酮的方法

摘要

本发明公开了一种从赭色小莫勒菌中高效提取3β-乙酰基-15α，22-二羟基何帕烷酮的方法。包括菌株培养，有机溶剂萃取代谢产物，硅胶柱分离，薄层色谱纯化，重结晶，得到目标物纯品。本发明设备简单，容易操作，成本低；获得的3β-乙酰基-15α，22-二羟基何帕烷酮纯度高，在医学应用上具有潜在的价值。

主权项

一种从赭色小莫勒菌中高效提取三萜类物质3β‑ 乙酰基‑15α，22‑ 二羟基何帕烷酮的方法，其特征在于：所述方法包括菌株培养、有机溶剂萃取、硅胶柱分离、薄层色谱纯化、重结晶，具体步骤如下：1) 菌株培养：取赭色小莫勒菌的菌块接种到PDB 培养基中，在100~160 r/min、24~28℃条件下连续培养7~10 d 即一级培养，按8％ ~10％接种量再次转接到PDB 培养基中，在100~160 r/min、24~28℃条件下再连续培养7~10 d 即二级培养，按8％ ~10％接种量再次转接到PDB 培养基中，在24℃ ~28℃条件下静止培养35~40 d 即三级培养；2) 有机溶剂萃取：三级培养的菌液与菌丝体过滤分离，菌液用乙酸乙酯摇瓶萃取，菌液与乙酸乙酯的体积比=2 ：1 ～ 1:1，摇瓶转速150 r/min ～ 250 r/min，温度15 ～ 20℃，摇5 h ～ 10 h 后，静止12 h ～ 20 h, 旋蒸乙酸乙酯部分浓缩得浸膏，回收乙酸乙酯；3）硅胶柱分离：1 倍浸膏体积的乙酸乙酯溶解浸膏，加样于200‑300 目硅胶柱上，用洗脱液洗脱，收集含有目标物的流出液，旋蒸浓缩得粗提物；4）薄层色谱纯化：将粗提物用1 倍浸膏体积的乙酸乙酯溶解，点样到薄层色谱板上，放入层析缸中，层析液为甲醇：二氯甲烷体积比=1:20 的展开体系；待展开体系爬到板的上沿时取出薄层制备色谱板，沿直线刮取Rf=0.43 处的硅胶，氯仿浸泡刮取的硅胶，过滤除去硅胶，旋蒸浓缩氯仿浸泡液，得白色物质；5）重结晶：白色物质用氯仿溶解，放在4℃冰箱里挥干，得白色晶体物质即赭色小莫勒菌中3β‑ 乙酰基‑15α，22‑ 二羟基何帕烷酮。