以幼花为外植体的虎眼万年青离体快繁方法

摘要

本发明属于花卉繁殖方法，具体涉及花卉的无性快速繁殖方法。以虎眼万年青幼花序的幼花基部为外植体进行组织培养，脱分化率及分化率均可达75％以上。由一块外植体诱导的愈伤组织经反复继代可分化出500株左右丛生芽，丛生芽表型统一。丛生芽生根率可达90％以上，在适宜环境下移栽成活率达100％。使虎眼万年青在相对短的时间内大规模繁殖出遗传背景完全相同、外观整齐的植株，再生植株变异低；再生体系非常高效；平均单株再生苗的成本极低，适合虎眼万年青的大批量高效快速繁殖，非常适用于工厂化生产。

主权项

以幼花为外植体的虎眼万年青离体快繁方法，其特征在于包括下列步骤：1)外植体接种及愈伤组织诱导：将幼花序花苞从子房下端剪开取下，将完整的花苞放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡60～90秒，用0.1～0.2％(质量/体积)的升汞溶液浸泡8～10分钟，无菌水冲洗3～5遍。将花苞从子房上部切开，然后将花苞上部大部分切掉，剩余部分纵切一刀或两刀，接种在含6‑BA1.5～2.0mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、蔗糖3.0～4.5％(质量/体积)，pH值为5.5～6.5的MS培养基上，20℃～30℃每天日光灯照射4～6小时，光照强度1500～2000Lux。25～35天继代一次，待长出黄绿色愈伤时即便可诱导分化；2)不定芽的诱导：将黄绿色的愈伤转接到诱导分化培养基：MS+6‑BA(1～1.5mg/L)+2，4‑D(1～2mg/L)+3.5～4.5％蔗糖(质量/体积)，pH值为5.5～6.5，40～50天继代一次，20℃～30℃每天日光灯光照8～10小时，光照强度1500～2000Lux。该愈伤分化能力可持续一年以上，从一块愈伤经反复继代可分化出500株左右的再生苗；3)根的诱导：再生植物转到1/2MS+NAA(0.5～2mg/L)+蔗糖2％(质量/体积)，pH值为5.5～6.5的生根培养基上，20℃～30℃每天日光灯光照12～14小时，光照强度1500～2000Lux；4)再生植株移栽：植株生根后即可移栽，移栽至草炭：蛭石：细沙＝3∶1∶1的种植基质中，移栽前将植株上的琼脂等杂物冲洗干净，种植基质121℃灭菌30～45分钟，10～15天浇一次透水便可成活。