食源性致病菌检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及一种食源性致病菌检测试剂盒，所述试剂盒包含12组引物及其探针，所述引物中，下游引物5′端均以生物素标记。所述试剂盒利用引物对待测样品中核酸进行扩增，形成的生物素化产物与固定于芯片表面的探针杂交形成探针-生物素化产物复合物。碱性磷酸酶-链霉亲和素偶联物与探针-生物素化产物复合物结合，再利用显色底物四唑硝基蓝/5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐(NBT/BCIP)与碱性磷酸酶发生呈色(蓝紫色)反应。通过判读在特定位点是否呈色，来检测样品中是否含有待检测的致病菌。该试剂盒检测通量高、快速、灵敏以及特异性强，具有很强的实用性。本发明还提供一种采用上述检测试剂盒的食源性致病菌检测方法。

主权项

一种食源性致病菌检测试剂盒，其特征在于，包括选自如下2组引物中的至少一组：第11组引物用于扩增梭状芽孢杆菌属的如SEQ ID NO.11所示的核酸片段；第12组引物用于扩增弯曲杆菌的如SEQ ID NO.12所示的核酸片段；所述第11组引物：上游引物序列如SEQ ID NO.23所示，下游引物序列如SEQ ID NO.35所示；所述第12组引物：上游引物序列如SEQ ID NO.24所示，下游引物序列如SEQ ID NO.36所示；2个下游引物5′端标记有生物素，用于后续的显色反应；还包括探针，所述探针为如下2个与所述2组引物对应的核酸片段中的至少一个：第11个探针与如SEQ ID NO.11所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ ID NO.47所示；第12个探针与如SEQ ID NO.12所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ ID NO.48所示；还包括固相载体，所述固相载体包括基体和固定在所述基体上的附着层，所述探针固定在所述附着层上；所述检测探针的5′端连接有15个胸腺嘧啶。