长爪沙鼠原代肝细胞的培养方法

摘要

本发明公开了一种长爪沙鼠原代肝细胞的培养方法，包括：（1）从消化成熟的离体长爪沙鼠肝脏中收集肝细胞初悬液，过滤，滤液除杂后加入含5%小牛血清的HBSS，反复离心洗涤，收集细胞沉淀于含20%新生牛血清的DMEM完全培养基中，调整肝细胞浓度为3.0×10⁵个～5.0×10⁵个/mL，制备成肝细胞悬液；（2）将肝细胞悬液接种于铺有鼠尾胶原的培养板中，于37℃、5%CO₂环境中培养，4h后除杂，将培养基更换成含细胞因子的维持培养基，细胞贴壁过夜后，得到长爪沙鼠原代肝细胞。该方法价格低廉，经济实用，操作简便易行，获得的肝细胞贴壁牢、活力高，培养细胞的成活率高，稳定可靠，适于大规模生产。

主权项

一种长爪沙鼠原代肝细胞的培养方法，其特征在于，包括步骤：（1）从消化成熟的离体长爪沙鼠肝脏中收集肝细胞初悬液，依次用100目和200目钢筛过滤，滤液除杂后加入含5%小牛血清的Hank's平衡盐溶液，反复离心洗涤，收集细胞沉淀于含20%新生牛血清的DMEM完全培养基中，调整肝细胞浓度为3.0×10⁵个～5.0×10⁵个/mL，制备成肝细胞悬液；所述的反复离心洗涤包括：800rpm离心3min、600rpm离心3min、400rpm离心3min及400rpm离心3min，弃上清；（2）将肝细胞悬液接种于铺有鼠尾胶原的培养板中，于37℃、5%CO₂环境中培养，4h后除去死亡及悬浮细胞，将培养基更换成含细胞因子的维持培养基，细胞贴壁过夜后，得到长爪沙鼠原代肝细胞；所述的含细胞因子的维持培养基为：在DMEM基础培养基中加入10%新生牛血清、5μg/mL胰岛素、4μg/mL地塞米松、10ng/mL表皮细胞生长因子、5ng/mL肝细胞生长因子和2%二甲基亚砜；pH=7.0‑7.4。