一种ToRCH-ELISA诊断试剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种ToRCH-ELISA诊断试剂的制备方法，该ToRCH-ELISA诊断试剂的制备方法包括制备风疹病毒、单纯疱疹病毒I型和II型、巨细胞病毒和弓形体抗原和建立ELISA；本发明通过制备风疹病毒、单纯疱疹病毒I型和II型、巨细胞病毒和弓形体抗原和建立ELISA发明了ToRCH-ELISA诊断试剂；本发明的技术效果具有快速、敏感、特异性强、重复性好的优点。

主权项

一种ToRCH‑ELISA诊断试剂的制备方法，其特征在于，该ToRCH‑ELISA诊断试剂的制备方法包括以下步骤：步骤一，制备病原体抗原，弓形体抗原经小白鼠腹腔传代增殖；风疹病毒在Vero细胞增殖；单纯疱疹病毒I型和II型在HeLa细胞中增殖；巨细胞病毒在人胚肺二倍体细胞中增殖；在长成单层的上述各种细胞上接种相应病毒，37℃吸附lh；PBS洗1次，换成2％小牛血清的细胞维持液；步骤二，待细胞病变+++时收获，反复冻融3次后，3500转／分离心30分，除去细胞碎片；30000转／分离心lh得病毒沉淀；用1mLPBS悬浮制成病毒液；加入终浓变为0.2％的甲醛，于37℃2h灭活得纯化病毒抗原，‑20℃保存备用；步骤三，纯化抗原经方阵滴定以阳性血清与阴性血清有最大差异的稀释度为最佳稀释度，或以能产生光密度为1.0的稀释度作为抗原的最佳稀释度确定最佳包被浓度，各种抗原包被于聚苯乙烯微孔内，4℃过夜，PBS洗3次，加含1％牛血清白蛋白的PBS封闭液37℃，3h，PBS洗2次，加稳定剂37℃处理lh，稳定剂为含10％硫酸铵的0.01mol／LTris一HCI缓冲液；步骤四，检测时将待测血清用样品稀释液作1：200稀释后加于包被孔，37℃保温30分，洗板3次～5次，加抗人IgM酶结合物，37℃保温30分，洗板3次～5次，TMB—H₂O₂显色，目测和仪器判断结果。