一种促使质粒发生连接反应的方法

摘要

本发明公开了一种促使质粒发生连接反应的方法。步骤如下：首先准备好目标DNA，以及ＤＮＡ连接酶，将其胶回收后充分混匀；２１摄氏度条件下反应１２小时；在操作台中，将全部能量转化至大肠感觉的感受态细胞中；所述大肠感觉感受细胞态需要事先经过氯化钙溶液冲洗；冷浴３－５分钟；每隔１０分钟混合、振荡、分离、悬置；上述行为反复十次；用移液枪悬浮细胞，涂抹在琼脂平板上；1个小时后，倒置平板，在37摄氏度的条件下培养15小时，即得；用移液枪悬浮细胞之前需要保留上清液；最后可以用灭过菌的竹棒挑取目标质粒。本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，转化效率低，而且可以比较完全的对比目的片段。

主权项

一种促使质粒发生连接反应的方法，其特征在于，步骤如下：首先准备好目标DNA，以及ＤＮＡ连接酶，将其胶回收后充分混匀；２１摄氏度条件下反应１２小时；在操作台中，将全部能量转化至大肠感觉的感受态细胞中；所述大肠感觉感受细胞态需要事先经过氯化钙溶液冲洗；冷浴３－５分钟；每隔１０分钟混合、振荡、分离、悬置；上述行为反复十次；用移液枪悬浮细胞，涂抹在琼脂平板上；1个小时后，倒置平板，在37摄氏度的条件下培养15小时，即得。