| 摘要 |
1. Однодоменное мини-антитело aHER2/aSKBR3-1 (SEQ1, 2), специфически связывающее рецептор эпидермального фактора роста HER2/ERBB2/neu, как экспонированный в повышенном количестве на поверхности определенных типов опухолевых клеток, так и очищенный белок, и способное через это взаимодействие, проникать внутрь клетки-мишени, на поверхности которой экспонирован HER2/ERBB2/neu.2. Способ получения однодоменного мини-антитела aHER2/aSKBR3-1 к белку-рецептору эпидермального фактора роста HER2/ERBB2/neu, включает следующие стадии:- иммунизацию двугорбого верблюда (Camelus bactrianus) препаратом опухолевых клеток, таких как SKBR3, содержащих на поверхности сильно повышенное (по сравнению с нормальными клетками) количество белка HER2/ERBB2/neu;- получение библиотеки последовательностей, кодирующих однодоменные мини-антитела;- процедуру селекции мини-антител, основанную на методе фагового дисплея и включающую стадию инкубации фаговых частиц с экспонированными на их поверхности мини-антителами с живыми растущими клетками (подобными SKBR3), экспрессирующими на своей поверхности в сильно повышенном количестве (по сравнению с нормальными клетками) белок HER2/ERBB2/neu, и последующий отбор именно тех вариантов рекомбинантных частиц, которые смогли проникнуть внутрь клетки-мишени и таким образом стали защищены от протеазной (трипсином) обработки клеток; на заключительном этапе селекции отбирают лишь те варианты клонов мини-антител, которые кодируют мини-антитела, способные специфически связываться также и с изолированным или рекомбинантным белком HER2/ERBB2/neu;- процедуру форматирования отобранных мини-антител, включающую присоединение к С-концу первичного мини-антитела дополните |
