从人羊膜上皮细胞中提取不饱和脂肪酸组合物的方法及应用

摘要

本发明涉及从人羊膜上皮细胞中提取呈游离状态不饱和脂肪酸组合物及其应用。该组合物主要由多不饱和脂肪酸(PUFAs)组成，包括：DHA、花生四烯酸、dihomo-γ-亚麻酸、γ-亚麻酸和亚油酸。该组合物可用于制备治疗神经系统退行性疾病（如帕金森病）、眼表疾病、心脑血管疾病和神经损伤性疾病的药物的应用。目前，以商品形式销售的PUFAs主要从深海鱼类或藻类中提炼出来，价格昂贵且产量有限。本发明从人羊膜上皮细胞内获取的呈游离状态的PUFAs组合物，来源充足，成本低廉，含量高且n-6/n-3比例分配合理，具有广阔的药用前景。

主权项

从人羊膜上皮细胞中制备不饱和脂肪酸甲酯组合物的方法，其特征在于：包括以下步骤： (1) 取人正常足月剖宫产胎盘，分离获取羊膜，清除致密层下结缔组织，1×PBS洗净，剪碎备用； (2) 用重量浓度0.01‑1.00%的胶原酶Ⅳ37℃消化2‑3小时，重量浓度0.10‑1.00%的胰蛋白酶室温下消化0.5‑1小时；(3) 收集消化液，1000转/分钟离心5‑10分钟，获取人羊膜上皮细胞；(4) 细胞破碎采用低温超高压连续流细胞破碎机，破碎全过程在4‑6℃低温水浴中进行；(5) 向细胞裂解液中加入正己烷，每升细胞裂解液中加入3升正己烷，以500转/分钟振荡12小时，提取脂肪酸；(6) 取上层有机相，用氮气吹干后，每升有机相加入0.28升三氟化硼甲醇溶液，置于80℃水浴中，进行脂肪酸甲酯化，得到甲酯化组合物；(7) 加入正庚烷进行萃取，振荡后取上层有机相，用氮气吹干，去除三氟化硼，正己烷复溶后上机测定；所述的不饱和脂肪酸选自：DHA、花生四烯酸、dihomo‑γ‑亚麻酸、γ‑亚麻酸和亚油酸。