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一种小叶红豆离体胚培养及植株再生方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1）取材方法：选取当年结实、籽粒饱满的豆荚为材料，采摘后置3‑5℃冰箱冷藏保存备用；2）培养基的配制：分别配制胚芽诱导培养基、初代芽诱导培养基、芽增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基，这些培养基的PH值为5.7‑5.9，培养基厚度为1.4～1.6 cm； 所述胚芽诱导培养基：1/2MS+0.5‑2.0mg·L‑1BA+0.1‑1.0mg·L‑1IAA+0.1‑0.3mg·L‑1NAA+5.0‑7.0g·L‑1Ag++18‑22g·L‑1Su+1.0‑1.5 g·L‑1Ac，所述初代芽诱导培养基：WPM +1.0‑2.0mg·L‑1BA+0.4‑0.6mg·L‑1KT+0.4‑0.6mg·L‑1IAA+0.4‑0.6mg·L‑1NAA+5.0‑7.0g·L‑1Ag++18‑22g·L‑1Su +1.0‑1.5 g·L‑1Ac，所述芽增殖培养基：WPM+1.0‑2.0mg·L‑1BA+0.5‑1.5mg·L‑1KT+0.1‑0.5mg·L‑1TDZ+0.4‑0.6mg·L‑1NAA+ 5.0‑7.0g·L‑1Ag+ +18‑22g·L‑1Su +1.0‑1.5 g·L‑1Ac，所述壮苗培养基：WPM+0.5‑1.0mg·L‑1BA+0.1‑0.5mg·L‑1KT+0.1‑0.5mg·L‑1NAA+0.5‑1.0mg·L‑1IAA+5.0‑7.0g·L‑1Ag+ +18‑22g·L‑1Su +1.0‑1.5 g·L‑1Ac，所述生根培养基：1/2WPM+0.1‑0.5mg·L‑1NAA+0.5‑1.5mg·L‑1IBA+ 5.0‑7.0g·L‑1Ag++18‑22g·L‑1Su +1.0‑1.5 g·L‑1Ac；3）材料消毒处理：豆荚用自来水进行表面冲洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15‑20min，用自来水滴冲1‑1.5h后去除豆荚外壳，取出种子，用双蒸水冲洗2‑3遍，在超净工作台上用质量分数为75%酒精消毒20‑40s，用质量分数为0.1%升汞消毒15‑17min，无菌水冲3‑4遍后，用消毒滤纸吸干种子表面水分，放在灭过菌的培养皿上，去除位于生长点1/10部分坚硬种子外壳及蜡质层后接种于胚芽诱导培养基上；4）胚芽诱导培养：100～150g胚芽诱导培养基接种种胚2‑4个；所述胚芽诱导的培养条件：培养室温度为23±2℃，前15～20天暗培养，后20～25天光照时间11‑12 h/d，光照强度为1000～1500lx；5）初代芽诱导培养：将经上述胚芽诱导培养，得到的生长良好的芽切成1～2cm长的带腋芽茎段，接种在初代芽诱导培养基中进行诱导培养；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间11‑12h/d，光照强度为1500‑2000lx，诱导培养时间30～50天；6）芽增殖培养：将经上述初代芽诱导培养，得到的生长良好的增殖芽切成1～2cm长的带腋芽茎段，接种在芽增殖培养基中进行增殖培养；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间11‑12h/d，光照强度为1500‑2000lx，增殖培养时间35～55天；7）壮苗培养：将经上述芽增殖培养，得到高2‑3cm完整的幼苗单株切下，接种在壮苗培养基中进行壮苗培养；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间11‑12h/d，光照强度为1500‑2000lx，壮苗培养时间20～30天；8）诱导生根培养：将经壮苗培养培养出来的带有2‑4片叶子、株高2‑4cm的幼苗单株转移到生根培养基中；所述生根培养的培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间11‑12h/d，光照强度为1500‑2000lx，生根培养时间25‑35天；9）试管苗完成：当试管苗长至2‑4cm高，有3‑5条形态正常的根，有4‑6片叶子，叶长2‑3cm时，完成小叶红豆的离体胚培养及植株再生培养。 |
