| 主权项 |
一种微生物酶法制造(3aS,6aR)‑内酯的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）、酯酶的生产采用巧克力微杆菌 (Microbacterium chocolatum) SIT101 CGMCC NO.4436发酵生产酯酶；（2）、中间产物(4S,5R)‑半甲酯的制备以内消旋二甲酯为步骤（1）所得的酯酶转化的底物，酯酶转化反应液中的产物经酸化、溶剂萃取、浓缩、干燥后得中间产物(4S,5R)‑半甲酯；所述的(4S,5R)‑半甲酯的制备：即将含酯酶的巧克力微杆菌(Microbacterium chocolatum) SIT101静息细胞，悬浮于浓度为0.1M，pH8.0的磷酸钠盐缓冲溶液中，加入内消旋二甲酯和二甲基亚砜，得反应混合物；再将所得的反应混合物在30℃、160r/min的恒温摇床上振摇反应48h后，用乙酸乙酯萃取酸化液，有机相用无水硫酸钠干燥之后减压蒸干得到(4S,5R)‑半甲酯；所述的(4S,5R)‑半甲酯的制备过程中所述的反应混合物中含酯酶的巧克力微杆菌(Microbacterium chocolatum) SIT101静息细胞的湿重为70g/L，内消旋二甲酯浓度为10~20g/L，缓冲液中二甲基亚砜的含量为5%V/V；（3）、(3aS,6aR)‑生物素手性内酯的制备步骤（2）所得的中间产物(4S,5R)‑半甲酯再与还原剂硼氢化钠或硼氢化钾在无水乙醇中进行还原反应，所得还原产物经内酯化、沉淀和干燥后最终得到高光学纯度的(3aS,6aR)‑生物素手性内酯；所述的(3aS,6aR)‑生物素手性内酯的制备：即冰浴条件下，将无水氯化钙与所得的(4S,5R)‑半甲酯溶解于无水乙醇中，加入还原剂硼氢化钠或硼氢化钾，然后室温下搅拌反应18‑30h后，加入盐酸溶液进行内酯化反应，内酯化反应后再加入蒸馏水，冰浴冷却沉淀，过滤后所得滤饼经真空干燥，即得(3aS,6aR)‑生物素手性内酯；所述的(3aS,6aR)‑生物素手性内酯的制备过程中(4S,5R)‑半甲酯、无水氯化钙、还原剂及无水乙醇的配比按摩尔体积比计算，即(4S,5R)‑半甲酯：无水氯化钙：还原剂：无水乙醇为1mol:1mol:3mol:4~5L。 |
