一种利用重组大肠杆菌发酵生产谷胱甘肽的方法

摘要

本发明公开一种利用重组大肠杆菌发酵生产谷胱甘肽的方法，包括以下阶段：（1）通过分批培养或补料分批培养大量获得表达外源性双功能谷胱甘肽合成酶的重组大肠杆菌细胞，所述双功能谷胱甘肽合成酶指同时具有γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶活性的蛋白；（2）过量表达阶段（1）所述双功能谷胱甘肽合成酶；（3）加入L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸三种前体氨基酸实现谷胱甘肽的高效发酵法生产。本发明利用表达外源双功能谷胱甘肽合成酶的重组大肠杆菌菌株发酵生产谷胱甘肽，不仅具有高GSH合成能力，而且不受GSH反馈抑制，具有反应快、谷胱甘肽的产量和得率高、生产周期短的优点。

主权项

一种利用重组大肠杆菌发酵生产谷胱甘肽的方法，其特征在于，包括以下阶段：（1）通过分批培养大量获得表达外源性双功能谷胱甘肽合成酶的重组大肠杆菌细胞，所述双功能谷胱甘肽合成酶指同时具有γ‑谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶活性的蛋白；（2）过量表达阶段（1）所述双功能谷胱甘肽合成酶；（3）加入L‑谷氨酸、L‑半胱氨酸和甘氨酸三种前体氨基酸实现谷胱甘肽的高效发酵法生产；阶段（1）中所述重组大肠杆菌为BL21/pET28a‑gshF或者JM109/pTrc99a‑gshF；阶段（3）中三种前体氨基酸的加入方式为一次性加入、多次分批加入或缓慢流加；发酵过程中使用的发酵碳源为葡萄糖、乳糖、甘油和乙酸中的一种或几种。