一种提高茯苓菌丝体蛋白含量和液体发酵生物量的方法

摘要

发明涉及生产技术生物制药，具体说是一种提高茯苓菌丝体蛋白产量和液体发酵生物量的方法。该方法包括步骤：（1）茯苓担孢子悬浮液制备；（2）Co60–γ辐射诱变茯苓担孢子；（3）担孢菌株配对；（4）接种马尾松浸液固体培养基斜面，该培养基由马尾松提取物、马铃薯提取物、葡萄糖组成；（5）接种马尾松提取物液体发酵培养基，该培养基由马尾松提取物、微晶纤维、葡萄糖、甘油、硫酸铵、硫酸镁、氢氧化钾、磷酸组成。本发明首次经诱变获得了菌丝蛋白含量高的茯苓菌株；采用的马尾松浸液固体培养基斜面较马铃薯葡萄糖培养基更有利于茯苓菌丝快速生长；采用的马尾松液体发酵培养基更有利于获得较高的生物量。

主权项

一种提高茯苓菌丝蛋白含量和液体发酵生物量的方法，其特征在于具体操作步骤如下：（1）收集茯苓担孢子，用无菌生理盐水调制孢子浓度为104～106个/ml，经辐射剂量为300Gray～900 Gray的Co60 –γ辐射诱变茯苓担孢子；（2） 将诱变茯苓担孢子悬浮液稀释10～100倍，于固体培养基平板中，26～28℃培养5～6天，将不同菌丝两两接在同一固体培养基平板中央，26～28℃培养4～6天，菌丝融为一体，取生长较快的组合，得到诱变菌株；（3）将诱变的茯苓菌株接种在固体培养基上，该培养基组成为马尾松浸液1.0%～4.0%，马铃薯水煮液15%～20%，葡萄糖0.8%～1.2%，琼脂1.5%～2.0%，25℃～29℃培养5～7天；（4）接种诱变菌株的菌块于液体发酵培养基中，该培养基组成为马尾松浸液1.0%～4.0%，微晶纤维0.8%～3.5%，葡萄糖1.0%～3.5%，甘油0.01%～0.05%，硫酸铵0.1%～0.4%，硫酸镁0.1%～0.3%，氢氧化钾0.02%～0.06%，磷酸0.02%～0.05%，水96.25%～87.16%，pH 5.5，25℃～29℃，80～120 r/min摇床培养5～7天；（5）发酵液8×104 Pa真空抽滤10 min，无菌水洗涤2～3次收集菌体，60℃烘干至恒重；（6）诱变菌株保藏于石蜡油中或砂土管中，4℃保存，每一年传代一次。