小RNA的3’-5’-qPCR定量检测技术

摘要

本发明涉及一种小RNA的3’-5’-qPCR定量检测技术，揭示了一种基于荧光定量PCR技术进行从内向外即3’→5’PCR，对小RNA进行高特异性、高灵敏度以及低成本检测和定量的方法。

主权项

一种检测待测样品中的特定小RNA的方法，其特征在于：所述方法包括：(1)从待测样品中提取总RNA；(2)以(1)的总RNA为模板，用小RNA特异逆转录引物进行逆转录反应，获得包含cDNA的逆转录产物；其中，所述的小RNA特异逆转录引物的5’端带有无关序列，3’端与小RNA的3’端互补；所述的无关序列与待测样品基因组中任何核酸序列不发生互补；(3)以(2)的包含cDNA的逆转录产物为模板，以小RNA特异正向引物和特异反向引物进行3’→5’PCR反应，获得PCR产物；所述的小RNA特异正向引物的5’端带有无关序列，3’端与小RNA逆转录获得的cDNA的3’端互补；(4)分析(3)的PCR产物，获得小RNA的存在情况及存在量。