一种双重病毒灭活制备破伤风人免疫球蛋白的方法

摘要

本发明公开了由含高效价破伤风抗体的健康人血浆分，经低温乙醇蛋白分离法分离纯化，并采用pH4.0,23～25℃21天孵放灭活病毒和DV50纳米膜除病毒膜双重病毒灭活生产工艺制。本发明的有益效果为：本发明提供的双重病毒灭活制备的破伤风人免疫球蛋白可大大降低经血液制品传播的疾病，制品质量完全符合《药典》要求。经用伪狂犬病毒、Sindbis病毒、HIV病毒进行验证，确实能够使其病毒滴度（TCID50）下降4.00个Log以上，完全保证制品更加安全、可靠，尤其适用于对破伤风抗毒素（TAT）有过敏反应者。

主权项

一种双重病毒灭活制备破伤风人免疫球蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）将原料血浆消毒后稀释0.3倍，调pH为7.15‑7.25，降温后喷入95%乙醇，乙醇的终浓度按照体积计为8%，喷入速度小于等于50L/h，再次调pH至7.15‑7.25，并搅拌2小时后离心分离出组分一，离心后得到组分一上清液，离心转速为8000‑10000r/min；所述操作中，原料血浆用0.14mol/L氯化钠溶液稀释，调pH所用溶液为pH为4的醋酸缓冲液，降温至0℃，所用95%乙醇的温度为‑15℃；2）将步骤1）得到的组分一上清液调pH为6.85‑6.95，喷入95%乙醇，乙醇的终浓度按照体积计为20%，喷入速度小于等于50L/h,再次调pH为6.85‑6.95，并搅拌2小时后静置2小时，加入硅藻土，加入量为每1000L反应液加入20kg硅藻土，继续搅拌20分钟，压滤分离出组分二和组分三的沉淀；3）将步骤2）得到的组分二和组分三的沉淀以氯化钠溶液溶解，调pH为5.05‑5.15，调温度为‑0.5℃‑0℃，加入95%乙醇至乙醇终浓度按照体积计为17%，而后搅拌2小时，静置6‑12小时，得到组分混合液，将组分混合液压滤得到组分混合液上清；4）将步骤3）得到的组分混合液上清脱盐脱醇后超滤浓缩，得到组分混合浓缩液；5）将步骤4）得到的组分混合浓缩液以凝胶柱进行层析提纯，得到层析蛋白液；6）将步骤5）得到的层析蛋白液进行透析后，再超滤浓缩，得到层析蛋白浓缩液；7）将步骤6）得到的层析蛋白浓缩液中加入麦芽糖，调pH后补水至最终蛋白质量百分含量为5.05%‑5.2%，除菌，得到免疫球蛋白一级制品；8）将步骤7）得到的免疫球蛋白一级制品进行孵放灭活，得到免疫球蛋白二级制品；9）将步骤8）得到的免疫球蛋白二级制品再次以水进行透析并超滤浓缩，得到免疫球蛋白二级制品浓缩液；10）将步骤9）得到的免疫球蛋白二级制品浓缩液中按每升10‑30g加入甘氨酸，并调pH得到免疫球蛋白三级制品；11）将步骤10）得到的免疫球蛋白三级制品在无菌条件下进行DV50除病毒，得到破伤风人免疫球蛋白。