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一种确定β‑甘露聚糖酶在饲料原料中最适添加量的方法，包括如下步骤：（1）得出每千克饲料原料中β‑甘露聚糖的量；（2）测量β‑甘露聚糖酶的酶活，所述β‑甘露聚糖酶的酶活定义为在37℃pH为5.5的条件下，每分钟内从过量底物中降解释放1μmol还原糖所需的酶量定义为1个酶活力单位，1U；所述底物为步骤（1）所述的饲料原料；（3）根据步骤（2）所得的酶活，及下述公式，计算出每克步骤（1）中所述饲料原料所需β‑甘露聚糖酶的量，即为理论添加量；Q＝(C×1U×1min)/(1μmol×M×120min)式中：Q——酶的理论添加量，U/g；C——每千克步骤（1）所述饲料原料中β‑甘露聚糖的量，g/kg；M——甘露糖的摩尔质量，180g/mol；120min——酶的作用时间；1U,1min,1μmol——酶活定义参数；（4）以步骤（3）所得酶的理论添加量为基数，记作Q；n为Q的倍数，以n×Q组成该酶的梯度添加量，其中n为1/2、1/4、1/6、1/8、1/10、1/20、1、2、4、6、8、10、20；（5）进行体外酶解实验，体外酶解实验的体系如下：1）将2g饲料原料加入15.0mL pH3.0的0.2mol/L乙酸‑乙酸钠缓冲溶液中，再加入0.5mL浓度为70mg/mL的胃蛋白酶溶液，混匀，得食糜液；胃蛋白酶溶液中溶剂为0.01mol/L盐酸水溶液；2）用1.0mol/L盐酸水溶液调节食糜液的pH值至3.0；3）将食糜液混合均匀后置于40℃振荡消化，消化75分钟；4）用1.0mol/L氢氧化钠水溶液调整步骤3）所得消化液的pH值至6.3，然后加入50mg胰酶；5）实验分两组，第一组称作加酶组，即向步骤4）所得体系中加入β‑甘露聚糖酶，所述酶的添加量为步骤（4）所设的梯度添加量；第二组称作不加酶组，即向步骤4）所得体系中加入2.0mL0.2mol/L pH6.3的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液；然后，第一组和第二组均置于40℃振荡消化，消化时间为120min；（6）还原糖测定，分别检测加酶组和不加酶组的还原糖的浓度，分别记作Ye和Y0，单位为mg/mL；（7）按照如下公式计算β‑甘露聚糖酶酶解产生的还原糖占饲料原料的质量百分含量：ΔM=(((Ye‑Y0)×D×V)/m)×100ΔM——酶解产生的还原糖占所加饲料原料的质量百分含量，%；D——测定液稀释倍数，等于1mL除以还原糖测定时离心上清液吸取量；V——消化反应体系总体积，27mL；m——消化反应称取饲料原料样品的质量，2000mg；100——百分比换算系数；（8）以n为横坐标，以对应的ΔM为纵坐标作图，得到曲线的拐点，并取拐点前两组和拐点后两组的n值；（9）将步骤（8）得到的n对应的组之间进行ΔM差异分析，按照步骤（8）的n由小到大的顺序，得到与步骤（8）的n最小的一组有显著差异的第一组，β‑甘露聚糖酶在该组饲料中的添加量就是β‑甘露聚糖酶在所述饲料原料中的最适添加量；所述酶为β‑甘露聚糖酶；所述还原糖为甘露糖。 |
