黄秋葵果实中两个活性黄酮苷的制备方法及其用途

摘要

黄秋葵果实中两个活性黄酮苷的制备方法及其用途，属于提取分离技术领域。以黄秋葵果实为原料，采用渗漉提取、闪蒸浓缩、萃取脱色、醇沉转移出多糖及果胶，继续真空浓缩、通过大孔吸附树脂柱分离富集、再结合凝胶树脂柱色谱技术从中分离得到5,7,3′,4′-四羟基-4′′-O-甲基-3-O-β-D-葡萄糖黄酮苷和5,7,3′,4′-四羟基-3-O-[β-D-葡萄糖基-(1→2)]-β-D-葡萄糖黄酮苷两个单体化合物，提取率分别为3.62％～8.66%和8.01％～12.98%，纯度均达到95％以上。本发明工艺简单、生产成本低，制得的两个黄酮苷具有很好抗氧化及抑菌活性。

主权项

1.黄秋葵果实中两个活性黄酮苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）原料的处理：取黄秋葵嫩果，以横段面切片后晒干或风干，备用；2）渗漉提取：将干燥的片状黄秋葵果实装入渗漉筒中，用折合黄秋葵干燥果实1～2倍量的40％～70％含水乙醇浸润4~6小时后装入渗漉桶中，用折合黄秋葵干燥果实10～18倍量的50％～70％含水乙醇进行渗漉提取，调节流速，以8~15 mL/min流速收集渗漉提取液；3）闪蒸浓缩：将渗漉提取液在水浴温度60～70℃，真空度为0.090 Mpa～0.095 Mpa的条件下采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓缩，调节待浓缩液的进液速度，以150～350 mL · min^-1的流量反复浓缩，得到折合每毫升浓缩液含0.5～1.0克原药材的浓缩液；4）脱色除杂处理：将浓缩液用石油醚萃取脱色除杂3～4次，每次用量为浓缩液与石油醚的体积比为1:1～1:3，将石油醚萃取液合并后进行真空浓缩，回收石油醚，萃取脱色后得到的浓缩液备用；5）醇沉转移出多糖与果胶：在上述浓缩液中加入95％的工业酒精调整至浓缩液中乙醇浓度达到70％～80％，放置过夜，析出多糖与果胶沉淀，将沉淀物转移出去另行利用，得到除糖后的浓缩液；6）继续真空浓缩：得到除糖后的浓缩液继续在50℃以下真空闪蒸浓缩，得到折合每毫升浓缩液含1.5～2.0克原药材的浓缩液；7）大孔树脂分离富集：得到的浓缩液通过Diaion HP-20大孔吸附树脂柱色谱分离富集，然后先用H₂O洗脱，再依次用10%～70%含水甲醇或含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70%丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并20%~60%含水甲醇或含水乙醇部位的洗脱液，将合并的洗脱液在50℃以下真空闪蒸浓缩，得到洗脱浓缩液；8）凝胶树脂分离纯化：将上述合并的洗脱浓缩液继续通过Toyopearl HW-40柱色谱，以H₂O、20% 含水甲醇或含水乙醇、40%含水甲醇或含水乙醇、60%含水甲醇或含水乙醇、70%丙酮梯度洗脱；9）步骤8）中20% 含水甲醇或含水乙醇洗脱部位减压浓缩干燥后，溶于少量水后通过MCI gel CHP-20 P柱色谱，以H₂O及不同浓度的含水甲醇或含水乙醇梯度洗脱，TLC检识，相同流分合并，得化合物2的浅黄色结晶；10）步骤8）中40% 含水甲醇或含水乙醇部位通过Sephadex LH-20柱色谱，以水及不同浓度的含水甲醇梯度洗脱，TLC检识，相同流分合并，得化合物1的浅黄色粗品；所述的化合物1为5,7,3′,4′-四羟基-4′′-O -甲基-3-O-β-D-葡萄糖黄酮苷，其结构式为：；所述的化合物2为5,7,3′,4′-四羟基-3-O-[β-D-葡萄糖基-(1→6)]-β-D-葡萄糖黄酮苷，其结构式为：。