荧光微球标记沙丁胺醇多克隆抗体的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开一种荧光微球标记沙丁胺醇多克隆抗体的方法，具体为：氨基修饰的荧光微球与活泼酯化的生物素偶联，将链霉亲和素与上述偶联物以1000:1的比例混合反应后，得到荧光微球与生物素-链霉亲和素的偶联物，最后将生物素化的沙丁胺醇多克隆抗体加入到荧光微球-生物素-链霉亲和素的偶联物溶液中反应即可得到目标产物。本发明得到的荧光微球标记沙丁胺醇多克隆抗体的新型偶联物能有效应用于沙丁胺醇荧光微球试纸条中，相应地提高了试纸条的特异性、灵敏度，从而能快速准确地定性且定量检测动物性食品中沙丁胺醇的残留量。

主权项

荧光微球标记沙丁胺醇多克隆抗体的方法，其特征在于：(1)氨基修饰的荧光微球与活泼酯化的生物素在PBS溶液中偶联反应2 h得到荧光微球‑生物素偶联物，再离心、洗涤除去未结合的生物素；(2)将链霉亲和素与荧光微球‑生物素偶联物混合轻摇反应2 h后，离心、用PBS溶液洗涤移除未偶联的链霉亲和素，得到荧光微球‑生物素‑链霉亲和素偶联物；(3)将生物素化的沙丁胺醇多克隆抗体加入到荧光微球‑生物素‑链霉亲和素的偶联物溶液中轻摇反应1 h后，洗涤、离心以除去未偶联上的生物素化沙丁胺醇多克隆抗体，即得到荧光微球标记沙丁胺醇多克隆抗体即荧光微球‑生物素‑链霉亲和素‑生物素化沙丁胺醇多克隆抗体； 所述活泼酯化的生物素为将生物素‑PEG5000复合物溶于DMF溶液中，加入二环己基碳亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺后室温搅拌反应24 h，然后离心弃沉淀，得到活泼酯化的生物素； 所述氨基修饰的荧光微球的制备方法：10 mg荧光微球洗净后超声溶解于1 mL蒸馏水中，加入20 μL冰乙酸和20 μL(3‑三甲氧基硅丙基)‑二乙基乙二胺超声溶解后，磁力搅拌3～4 h，用10 mM pH5.5的MES缓冲液洗涤并重悬；所述荧光微球粒径为175 nm。